IL-18在肺纖維化大鼠肺內(nèi)的表達與作用研究.pdf

1、目的：1.檢測白細胞介素．18(interleukin,IL-18)在博萊霉素(BLM)誘導大鼠肺纖維化模型中的表達；2.體外分離培養(yǎng)大鼠肺成纖維細胞，研究重組大鼠白細胞介素18(rrlL-18)對肺成纖維細胞的作用及機制，以探討IL-18在肺纖維化的形成和發(fā)展進程中所起的作用。 方法：1.健康雌性SD大鼠60只，隨機分兩組，每組30只。實驗組：氣管內(nèi)一次性注入生理鹽水稀釋的BLM(5mg·kg-1)；對照組：氣管內(nèi)注入生理鹽水

2、(0.2～0.3ml)。于給藥后第1、3、7、14、28天用過量氯胺酮腹腔注射的方法隨機處死實驗組及對照組大鼠各6只。無菌操作下取出大鼠肺組織，RT-PCR法檢測肺組織中IL-18 mRNA表達，免疫熒光法檢測肺組織IL-18蛋白的表達及定位；2.體外分離培養(yǎng)新生大鼠肺成纖維細胞，RT-PCR法檢測正常肺成纖維細胞IL-18的基因表達；采用MTr法檢測rrIL-18對成纖維細胞增殖反應的影響；半定量RT-PCR法檢測rrIL-18干預前

3、后成纖維細胞中Ⅲ型膠原蛋白、TNF-a、MMP9、IL-13的表達變化。 結果：1.肺纖維化模型復制成功；IL-18基因表達相對灰度值在造模后不同時期與對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，各個時期之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01.)。在肺纖維化形成過程中，實驗組中的IL-18的基因和蛋白表達呈現(xiàn)出如下趨勢：自BLM注入后第1天開始迅速升高，至第7天到達高峰，以后逐漸下降，但第28天仍高于正常。在對照組肺泡上皮細胞、

4、肺泡巨噬細胞和小血管內(nèi)皮細胞中有少量表達，在纖維化肺組織的大多數(shù)細胞中表達顯著增高，且纖維化嚴重區(qū)域較多成纖維細胞也呈陽性反應。 2.成功培養(yǎng)大鼠肺成纖維細胞；正常細胞未檢測到IL-18 mRNA表達，但IL-18能促進肺成纖維細胞增殖，與對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；IL-18干預早期顯著增強成纖維細胞表達Ⅲ型膠原、TNF-a mRNA，與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；IL-18不能誘導成纖維細胞表達MM