化瘀理肺方對大鼠肺纖維化的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：
　　 1.建立大鼠肺間質(zhì)纖維化模型；2.觀察化瘀理肺方對大鼠肺間質(zhì)纖維化的治療作用；3.探討化瘀理肺方對大鼠肺間質(zhì)纖維化模型肺組織勻漿中TNF-α、IFN-γ、IL-4含量的影響；4.對比化瘀理肺方與氫化可的松琥珀酸鈉對大鼠肺間質(zhì)纖維化模型肺組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)及肺組織勻漿中TNF-α、IFN-γ、IL-4含量的影響的差異。
　　 方法
　　 健康雄性wistar大鼠84只,體重180～220g,購于山東中醫(yī)藥

2、大學(xué)實驗動物中心(生產(chǎn)許可證號SCX魯20050015)。隨機(jī)分為4組,模型組、中藥組、激素組與對照組各21只,用1％戊巴比妥鈉(35mg.kg-1)腹腔注射麻醉后,將大鼠仰臥位固定于實驗臺上,將頭和四肢固定,用開口器固定口腔,拉出舌,用壓舌板壓舌腹,在額鏡直視下,在大鼠吸氣瞬間,迅速將帶接頭的硬脊膜外麻醉導(dǎo)管插入氣管約1～2厘米,同時與1ml注射器相連,可見導(dǎo)管內(nèi)液體隨大鼠呼吸而波動,前三組大鼠氣管內(nèi)一次性灌注0.4％博萊霉素0.25

3、mL(5mg.kg-1),第4組注入生理鹽水0.25ml作為正常對照組,注入后立即旋轉(zhuǎn)大鼠,使藥液在肺內(nèi)均勻分布。次日開始,對照組與模型組每天給予生理鹽水2mL/只灌胃,中藥組每天給予化瘀理肺方藥物17190mg.kg-1灌胃,激素組每天給予氫化可的松琥珀酸鈉25mg.kg-1腹腔注射。給藥過程中觀察動物的一般情況:動物活動、精神狀態(tài)、皮毛、體型、攝食、糞便等。4組分別于第7、14、28天隨機(jī)處死7只。具體方法如下:用1％戊巴比妥鈉(3

4、5mg.kg-1)腹腔注射,麻醉后將大鼠仰臥固定,沿腹中線逐層切開腹壁,腹主動脈放血處死,打開胸腔,取出并分離肺組織,觀察各組大鼠雙肺外觀情況,取右肺,放入冷生理鹽水中漂洗除去浮血,濾紙吸干后,在冰浴上剪成碎塊,制成10％肺勻漿,3000r.min-1離心10min后取上清液于-70℃冰箱保存,統(tǒng)一測定TNF-α、IFN-γ、IL-4,左肺浸于10％福爾馬林固定,常規(guī)石蠟包埋、切片,HE染色,用光鏡觀察。
　　 結(jié)果
　　

5、 1.各組大鼠一般情況觀察:進(jìn)入結(jié)果分析的大鼠有84只,正常對照組大鼠無死亡,活動良好,體格健壯,營養(yǎng)好,皮毛光亮、致密；模型組均有不同程度的咳嗽,呼吸困難,飲食差,體重下降,體格瘦小,精神萎靡,活動量明顯下降；激素組造模后前期表現(xiàn)與模型組相似,治療1周后稍有好轉(zhuǎn),但活動量、消瘦未見明顯改善；中藥組開始表現(xiàn)也與模型組相似,治療后進(jìn)食、體格、活動量均明顯好轉(zhuǎn),精神狀態(tài)較好。
　　 2.肺組織大體觀察:對照組雙肺外觀無異常,肺葉輪

6、廓清晰,呈粉紅色,表面光滑,彈性良好；模型組第7天雙肺表面可見散在斑點狀出血,肺體積增大,14天雙肺體積縮小,彈性差,仍可見散在出血點,并可見大小不等的散在結(jié)節(jié)狀改變,雙肺呈灰白色,第28天雙肺灰白色,體積明顯縮小且硬度增加,肺表面可見大量結(jié)節(jié)樣改變；激素組與模型組相似,部分肺葉表面光滑,局部見大小不等結(jié)節(jié)樣改變,邊緣有點狀出血,部分肺葉體積縮小；中藥組與對照組相近,部分呈暗紅色,偶見大小不等結(jié)節(jié)樣改變,邊緣有點狀出血及部分肺葉體積縮小

7、。
　　 3.肺系數(shù)的比較:模型組、中藥組、激素組第7、14天和28天時肺系數(shù)均顯著大于對照組(P<0.01),中藥組、激素第7、14、28時肺系數(shù)均小于模型組(P<0.01),中藥組于第7、14天和第28天肺系數(shù)均小于激素組(P<0.01)。
　　 4.肺組織光鏡病理學(xué)觀察:對照組各時間段大鼠肺組織大多數(shù)結(jié)構(gòu)清晰,均未出現(xiàn)明顯形態(tài)學(xué)改變；模型組第7天炎癥明顯,可見大量炎性細(xì)胞浸潤,并可見纖維細(xì)胞增多,第14天雙肺大量炎

8、性細(xì)胞浸潤,肺泡間隔增寬并可見明顯增多的成纖維細(xì)胞,膠原纖維沉積,肺泡變形,第28天可見肺部炎癥明顯減輕但可見大量成纖維細(xì)胞與膠原基質(zhì),肺泡壁明顯增厚可見部分出現(xiàn)萎縮,肺泡間隔明顯增寬,肺泡大部分消失,肺部炎性細(xì)胞浸潤情況較前有所減輕；激素組肺泡炎的程度同模型組比較有明顯的減輕(P<0.01或P<0.05),肺纖維化程度與模型組比較有所減輕,但在第28天時不明顯(P>0.05)。中藥組肺纖維化的程度均較模型組明顯減輕(P<0.01),第

9、28天時同激素組比較也有明顯的減輕(P<0.05),肺泡炎癥程度在各期均較模型組減輕(P<0.01或P<0.05),但肺泡炎癥與纖維化同對照組比較仍較嚴(yán)重(P<0.01或P<0.05)。
　　 5.肺組織勻漿中TNF-α、IFN-γ、IL-4含量變化:模型組、中藥組及激素組肺組織勻漿中TNF-α含量于第7、14天時比正常對照組均顯著升高(P<0.01或P<0.05),中藥組和激素組明顯低于模型組(P<0.01或P<0.05),差

10、異均有顯著性的統(tǒng)計學(xué)意義,而中藥組和激素組差異無統(tǒng)計學(xué)意義；第28天時各組大鼠肺組織TNF-α含量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義,第7、14和28天時,對照組、模型組、中藥組、激素組TNF-α含量均稱遞減趨勢,對照組、中藥組與激素組組內(nèi)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義,模型組第7天與第14天比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,模型組于第7天和28天、第14天與第28天比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。模型組肺組織勻漿中IFN.Y含量于第7、14、28天時顯

11、著低于對照組(P<0.01或P<0.05),激素組于第7、14、28天時明顯高于模型組(P<0.01或P<0.05),而低于對照組(P<0.01或P<0.05),中藥組于第7天時與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但第14、28天時,低于對照組(P<0.01或P<0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,中藥組與第7、14天時明顯高于模型組(P<0.01或P<0.05),于第28天時差異無統(tǒng)計學(xué)意義,中藥組與激素組于第7、14及28天時差異均無統(tǒng)計學(xué)意義,第

12、7、14和28天時,對照組、模型組、中藥組與激素組中IFN-γ含量均呈下降趨勢,對照組、、中藥組與激素組組內(nèi)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義,模型組第7天與第14天比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,第7天和14天、第7天和28天比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。模型組、中藥組及激素組于第7、14和28天時IL-4含量比對照組均顯著升高(P<0.01),而中藥組和激素組明顯低于模型組(P<0.01),差異均有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義；第7天時,中藥組與

13、激素組差異無統(tǒng)計學(xué)意義,但于第14、28天時,中藥組IL_4含量均低于激素組(P<0.01),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。第7、14和28天時,各組IL-4含量均呈遞減趨勢,正常對照組組內(nèi)差異無統(tǒng)計學(xué)意義,模型組、中藥組與激素組組內(nèi)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論
　　 1.化瘀理肺方和氫化可的松琥珀酸鈉均可降低BLM致大鼠肺纖維化模型的肺系數(shù)；
　　 2.化瘀理肺方對BLM致大鼠肺纖維化模型的肺泡炎和肺纖