Ezrin蛋白在食管癌中表達(dá)模式的改變.pdf

1、Ezrin/Radixin/Moesin是一組高度同源蛋白,統(tǒng)稱為 ERM,是近年來腫瘤相關(guān)蛋白研究領(lǐng)域中的熱點。ERM蛋白大多位于絲狀突和膜的伸展部位,其基本功能是將肌動蛋白栓系到細(xì)胞膜和錨定到膜蛋白的特定部位上,這樣可維持細(xì)胞膜表面的一些特殊結(jié)構(gòu),如微絨毛和細(xì)胞膜突起。除此之外,ERM蛋白還參與細(xì)胞表面粘附分子的定位,通過細(xì)胞與細(xì)胞,細(xì)胞與基質(zhì)之間的相互作用參與細(xì)胞粘附作用,ERM蛋白還是酪氨酸激酶的受體,并通過RhoGTP酶參與信

2、號轉(zhuǎn)導(dǎo),同時參與Akt介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡機(jī)制。因此,ERM蛋白通過維持細(xì)胞的基本形態(tài)和運動而與腫瘤的發(fā)生發(fā)展特別是侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　本課題組以往研究發(fā)現(xiàn),具轉(zhuǎn)移特性的SHEEMT食管癌細(xì)胞Ezrin表達(dá)水平顯著高于其前體不具轉(zhuǎn)移特性的SHEEIMM永生化食管上皮細(xì)胞Ezrin表達(dá)水平。然而,到目前為止,關(guān)于 ERM蛋白在食管癌組織中的表達(dá)情況以及其與患者的臨床及病理資料如病理分級、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的相關(guān)性還未見報道,因此

3、本課題在原有工作基礎(chǔ)上,對食管癌臨床樣本中Ezrin的表達(dá)模式進(jìn)行了研究,并且檢測了ERM家族中另外兩個成員的表達(dá)情況,以期對該家族成員在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用有更廣泛和進(jìn)一步認(rèn)識。
　　內(nèi)容與方法:
　　1.收集89例食管組織石蠟樣本,包括40例食管癌組織、42例切緣食管粘膜組織及7例食管卷片蠟塊,用免疫組織化學(xué)方法檢測Ezrin的表達(dá)及其定位情況。
　　2.用western blot方法檢測新鮮食管癌及其切緣食管粘

4、膜組織中的Ezrin、Radixin、Moesin和PCNA蛋白的表達(dá)水平。
　　3.以β-actin為內(nèi)參照,用熒光定量RT-PCR檢測新鮮食管癌及其切緣食管粘膜組織中Ezrin基因的mRNA水平。
　　結(jié)果:
　　1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示,Ezrin在切緣食管粘膜細(xì)胞中主要分布在胞膜,而在高分化食管癌組織中,胞漿和胞膜均出現(xiàn)Ezrin陽性信號,在中分化食管癌組織中,Ezrin則彌散分布于胞漿中。
　　2. W

5、estern blot結(jié)果顯示在49例配對樣本食管癌組織中,有13例樣本Ezrin表達(dá)上調(diào),占26.5％;另外36例Ezrin表達(dá)下調(diào),占73.5%。
　　3.熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示癌組織與切緣食管粘膜組織相比,Ezrin基因mRNA的水平有顯著性差異(P<0.05),且切緣組織中Ezrin基因mRNA的相對拷貝數(shù)是癌組織中的3.60±3.60倍。
　　4.與切緣食管粘膜組織相比,PCNA在43例(87.8%)癌組織中

6、的表達(dá)水平明顯升高。
　　5.統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn),在食管癌組織中,Ezrin表達(dá)下調(diào)組PCNA的表達(dá)水平(10.06±9.74, mean±SD)明顯高于Ezrin表達(dá)上調(diào)組中PCNA的表達(dá)水平(5.01±4.47,mean±SD)(P<0.05)。
　　6.通過western blot檢測ERM蛋白在67例食管癌及其切緣食管粘膜組織中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)在癌組織中,Ezrin/Radixin,47例表達(dá)下調(diào)(T/N<1),20例表達(dá)上

7、調(diào)(T/N>1);而 Moesin,10例表達(dá)下調(diào)(T/N<1),57例表達(dá)上調(diào)(T/N>1)。
　　7.通過統(tǒng)計學(xué)分析,發(fā)現(xiàn) Ezrin表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期和病理分級等臨床指標(biāo)之間沒有明顯相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　1. Ezrin在食管癌及切緣食管粘膜組織中的位置分布有胞膜分布、胞漿分布和胞膜胞漿混合分布等三種模式。惡性程度越高的癌細(xì)胞越易具有胞漿分布模式,說明Ezrin細(xì)胞定位的變化可