PIK3CA基因在不同外陰病變組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的： 外陰鱗狀細(xì)胞癌(vulvar squamous cell carcinoma,VSCC)大約占女性外陰惡性腫瘤的80～90％。但很久以來，其遺傳學(xué)研究十分有限，大多為已知單個(gè)癌基因或抑癌基因突變和表達(dá)的相關(guān)性的報(bào)道，國(guó)內(nèi)外至今尚未發(fā)現(xiàn)外陰鱗癌相關(guān)基因克隆的報(bào)道。磷脂酰肌醇-3-激酶催化亞單位α(phosphatidylinositol-3 kinasecatalytic alpha，PIK3CA)基因是近年來發(fā)現(xiàn)的一種癌

2、基因，它編碼的蛋白是PIK3CA，即P13Kp110 α。該基因的擴(kuò)增或變異與多種腫瘤(如：甲狀腺癌，肺癌，胃癌，胰腺癌，肝癌，子宮內(nèi)膜癌，宮頸癌，卵巢癌等)的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。但PIK3CA基因在外陰癌變中作用的研究尚屬空白。 本實(shí)驗(yàn)前期已經(jīng)利用比較基因組雜交技術(shù)檢測(cè)出外陰鱗癌組織中染色體3q區(qū)域內(nèi)存在明顯的基因擴(kuò)增，PIK3CA基因恰位于3q基因擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)。為了進(jìn)一步探索PIK3CA基因在外陰鱗癌發(fā)病中的作用，本實(shí)驗(yàn)采用免

3、疫組化和圖象分析的方法對(duì)外陰病變組織中PIK3CA基因的表達(dá)進(jìn)行研究和半定量分析。 材料與方法: 標(biāo)本來源：收集1997年5月-2005年5月間收治的外陰病變患者手術(shù)切除的石蠟標(biāo)本共76例，其中外陰鱗癌30例，重度不典型增生、原位癌16例，輕、中度不典型增生20例。另取因婦產(chǎn)科其他良性病變行手術(shù)治療患者的外陰正常組織10例作為對(duì)照。所有患者術(shù)前均未接受化學(xué)、免疫及放射治療。 實(shí)驗(yàn)方法：采用免疫組化SP法，按試劑盒

4、說明進(jìn)行。其中一抗稀釋液濃度為1：75。本研究以已知陽性切片作為陽性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照，每例標(biāo)本常規(guī)進(jìn)行蘇木素染色。結(jié)果判定及圖像分析：結(jié)果判定：以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性。圖像分析：每例隨機(jī)選取6個(gè)完整而不重疊的視野通過MetaMorph/EvolutionMp5.0/Bx51顯微圖像分析系統(tǒng)測(cè)定PIK3CA蛋白免疫組化反應(yīng)陽性顆粒的平均光密度，取每張切片的均值作為該例的測(cè)量值。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方

5、法：采用wilcoxon兩樣本秩和檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果: PIK3CA基因在外陰癌變組織中的表達(dá)PIK3CA在外陰鱗癌和重度不典型增生、原位癌組中的表達(dá)明顯高于正常外陰上皮和輕、中度不典型增生組(P<0.01)；外陰鱗癌與重度不典型增生、原位癌組比較，以及正常外陰上皮與輕、中度不典型增生組比較，PIK3CA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在外陰鱗癌組中，PIK3CA的表達(dá)與臨床分期、組織分化