PIK3CA基因沉默對阿司匹林抗骨髓瘤作用的影響及機制研究.pdf

1、目的：
　　1.通過檢測阿司匹林（ASA）對人骨髓瘤細胞株RPMI-8226細胞的PIK3CA基因及蛋白表達的影響，探討PIK3CA基因作為ASA抗骨髓瘤作用靶點的可行性。
　　2.通過沉默PIK3CA基因后檢測ASA對RPMI-8226細胞增殖活性的影響，及其下游效應(yīng)蛋白pAKT的變化，探討PIK3CA基因在ASA抗骨髓瘤效應(yīng)中的作用及分子機制。
　　方法：
　　1.采用CCK-8方法，檢測不同濃度ASA（0、

2、2.5、5、10mmol/L）處理RPMI-8226細胞24h、48h、72h后細胞增殖變化。
　　2.采用實時熒光定量PCR和Western blot法檢測不同濃度ASA對RPMI-8226細胞PIK3CA基因及蛋白表達水平。
　　3.利用siRNA干擾技術(shù)，將PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染RPMI-8226細胞，熒光顯微鏡下觀測細胞轉(zhuǎn)染效果，實時熒光定量PCR檢測PIK3CA mRNA表達以檢測基因沉默效果。
　　4.

3、采用CCK-8方法，檢測沉默PIK3CA基因后，ASA處理后RPMI-8226細胞增殖抑制變化。
　　5.采用流式細胞儀，檢測沉默PIK3CA基因后，ASA處理后RPMI-8226細胞凋亡與周期變化。
　　6.采用Western blot法，檢測沉默PIK3CA基因后，ASA處理后RPMI-8226細胞AKT與pAKT蛋白表達的變化。
　　結(jié)果：
　　1.在2.5～10mmol/L范圍內(nèi)，ASA以劑量依賴性抑制骨

4、髓瘤細胞株RPMI-8226細胞增殖。在24～72h內(nèi)，ASA對RPMI-8226細胞的增殖抑制率呈時間依賴性。
　　2.在2.5～10mmol/L范圍內(nèi)，ASA以劑量依賴性抑制RPMI-8226細胞的PIK3CA基因與蛋白表達。
　　3.PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染RPMI-8226細胞后，PIK3CA基因表達下降83.2％，表明基因沉默效果較好。
　　4.與對照組相比，PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染后，ASA對RPMI-

5、8226細胞的抗增殖活性明顯下降，且并不隨ASA濃度增大而變化。
　　5.與對照組相比，PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染后，ASA對RPMI-8226細胞的凋亡誘導(dǎo)活性明顯下降。
　　6.與對照組相比，PIK3CAsiRNA轉(zhuǎn)染后，ASA對RPMI-8226細胞的G1期阻滯作用明顯下降。
　　7. ASA以劑量依賴性抑制RPMI-8226細胞pAKT蛋白表達，但不影響總AKT蛋白表達。沉默PIK3CA基因后，ASA對RPMI

6、-8226細胞pAKT蛋白抑制作用明顯減弱。
　　結(jié)論：
　　1.ASA以濃度依賴性抑制骨髓瘤細胞株RPMI-8226細胞的PIK3CA基因及蛋白表達。
　　2.PIK3CA基因沉默可明顯減弱ASA對RPMI-8226細胞的增殖抑制、凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)及細胞周期G1期阻滯作用。
　　3.沉默PIK3CA基因顯著降低ASA對RPMI-8226細胞AKT磷酸化的抑制作用。
　　4.ASA通過抑制PIK3CA基因及下游