利用木糖選擇系統(tǒng)獲得HAL1轉(zhuǎn)基因百脈根（Lotus cirniculatus）植株及耐鹽性鑒定.pdf

1、隨著生物技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因技術(shù)已經(jīng)成為培育植物新品種的重要手段，許多重要性狀已經(jīng)通過此方法應(yīng)用于生產(chǎn)。與此同時，公眾對標記基因及其產(chǎn)物安全性的質(zhì)疑也成為植物轉(zhuǎn)基因面臨的一個重要問題。所以，構(gòu)建環(huán)境友好型的安全轉(zhuǎn)化載體，有效控制目的基因的表達是當前植物轉(zhuǎn)基因的一個發(fā)展趨勢。本研究利用逆境誘導(dǎo)型啟動子構(gòu)建植物表達載體，通過安全的木糖篩選系統(tǒng)，用于對百脈根(Lotus cirniculatusL.)進行轉(zhuǎn)化，以期提高百脈根的耐鹽性。

2、該載體以來源于大腸桿菌(Escherichia coli)的木糖異構(gòu)酶基因XylA為選擇標記基因。木糖異構(gòu)酶(葡萄糖異構(gòu)酶)廣泛分布于動物和部分植物體內(nèi)，而且大量應(yīng)用于食品工業(yè)中，以該基因為選擇標記，不存在安全性問題。該基因是以大腸桿菌基因組DNA為模板，根據(jù)報道的基因序列設(shè)計引物，用PCR方法克隆獲得。經(jīng)序列比較，該基因序列與報道的序列同源性為100％，其編碼框全長1323bp，編碼440個氨基酸。 該載體利用擬南芥(Arab

3、idopsis thaliana)逆境誘導(dǎo)型的rd29A啟動子驅(qū)動目的基因——耐鹽基因HAL1。根據(jù)報道序列設(shè)計引物，從擬南芥基因組中克隆了rd29A啟動子，與報道的序列同源性為99％。該啟動子序列為865bp，含有2個DRE元件和4個ABARE元件。以該啟動子驅(qū)動gus表達，染色結(jié)果表明該啟動子受高鹽、高滲等逆境和ABA誘導(dǎo)。 本研究建立了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的基于木糖選擇系統(tǒng)的百脈根轉(zhuǎn)化體系。以百脈根子葉為外植體，抑菌、分化、篩選培養(yǎng)