利用木糖選擇系統(tǒng)獲得HAL1轉基因百脈根（Lotus cirniculatus）植株及耐鹽性鑒定.pdf

1、隨著生物技術的發(fā)展，轉基因技術已經成為培育植物新品種的重要手段，許多重要性狀已經通過此方法應用于生產。與此同時，公眾對標記基因及其產物安全性的質疑也成為植物轉基因面臨的一個重要問題。所以，構建環(huán)境友好型的安全轉化載體，有效控制目的基因的表達是當前植物轉基因的一個發(fā)展趨勢。本研究利用逆境誘導型啟動子構建植物表達載體，通過安全的木糖篩選系統(tǒng)，用于對百脈根(Lotus cirniculatusL.)進行轉化，以期提高百脈根的耐鹽性。

2、該載體以來源于大腸桿菌(Escherichia coli)的木糖異構酶基因XylA為選擇標記基因。木糖異構酶(葡萄糖異構酶)廣泛分布于動物和部分植物體內，而且大量應用于食品工業(yè)中，以該基因為選擇標記，不存在安全性問題。該基因是以大腸桿菌基因組DNA為模板，根據報道的基因序列設計引物，用PCR方法克隆獲得。經序列比較，該基因序列與報道的序列同源性為100％，其編碼框全長1323bp，編碼440個氨基酸。 該載體利用擬南芥(Arab

3、idopsis thaliana)逆境誘導型的rd29A啟動子驅動目的基因——耐鹽基因HAL1。根據報道序列設計引物，從擬南芥基因組中克隆了rd29A啟動子，與報道的序列同源性為99％。該啟動子序列為865bp，含有2個DRE元件和4個ABARE元件。以該啟動子驅動gus表達，染色結果表明該啟動子受高鹽、高滲等逆境和ABA誘導。 本研究建立了農桿菌介導的基于木糖選擇系統(tǒng)的百脈根轉化體系。以百脈根子葉為外植體，抑菌、分化、篩選培養(yǎng)