花粉介導(dǎo)獲得轉(zhuǎn)基因玉米植株及轉(zhuǎn)基因玉米雜交后代研究.pdf

1、玉米（Zea mays L.）屬禾本科、玉米屬植物，在我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有非常重要的地位。通過(guò)基因工程的手段選育具有耐旱、耐鹽堿和抗病的玉米新品種對(duì)于提高玉米的產(chǎn)量具有非常重要的作用。本論文主要分兩部分:1）通過(guò)超聲波輔助花粉介導(dǎo)法將含有BADH基因的質(zhì)粒表達(dá)載體pBin438導(dǎo)入玉米自交系中，證明此方法在玉米轉(zhuǎn)基因研究中是一種簡(jiǎn)便且高效的轉(zhuǎn)化方法;2）將通過(guò)花粉介導(dǎo)法獲得的轉(zhuǎn)基因玉米植株進(jìn)行雜交組配，通過(guò)將其農(nóng)藝性狀和抗病性與對(duì)照進(jìn)行比

2、較，可以得出轉(zhuǎn)基因玉米的雜交后代的農(nóng)藝性狀普遍優(yōu)于對(duì)照。主要的研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:
　　(1)本研究主要是通過(guò)超聲波輔助花粉介導(dǎo)法建立玉米轉(zhuǎn)基因體系。通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)首先確定了所用的緩沖液為20％的蔗糖溶液，超聲波的處理參數(shù)為:處理強(qiáng)度為200W，處理時(shí)間8s，間隔時(shí)間5s，處理次數(shù)6次。采用超聲波輔助花粉介導(dǎo)法將甜菜堿醛脫氫酶(betain aldehyde dehydrogenase，BADH)基因轉(zhuǎn)化玉米自交系，經(jīng)過(guò)卡那霉素篩選、

3、PCR擴(kuò)增檢測(cè)后得到轉(zhuǎn)基因玉米植株。轉(zhuǎn)化處理的393株玉米自交系植株有105株結(jié)實(shí)，結(jié)實(shí)率為26.7％，共收獲種子464粒。轉(zhuǎn)化處理后得到的種子經(jīng)過(guò)卡那霉素處理后獲得308株卡那霉素抗性植株，其中，PCR擴(kuò)增呈陽(yáng)性的植株有98株。因此，以收獲的轉(zhuǎn)化處理種子為基數(shù)，通過(guò)超聲波輔助花粉介導(dǎo)法對(duì)甜菜堿醛脫氫酶(BADH)基因轉(zhuǎn)化時(shí)的轉(zhuǎn)化效率為21.1％。
　　(2)本試驗(yàn)以?！?2-1’轉(zhuǎn)基因玉米株系作父本和13株不同的金黃96C轉(zhuǎn)基因

4、玉米株系作母本進(jìn)行雜交所得13個(gè)雜交種作為試驗(yàn)材料，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因玉米雜交后代農(nóng)藝性狀調(diào)查。通過(guò)與非轉(zhuǎn)基因玉米雜交后代的農(nóng)藝性狀進(jìn)行比較和抗病性鑒定，可以看出轉(zhuǎn)基因玉米雜交后代的發(fā)病率明顯低于非轉(zhuǎn)基因玉米雜交后代，轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因玉米雜交后代在株高、穗位高、穗長(zhǎng)、籽粒中和百粒重五個(gè)性狀上存在明顯差異，在穗粗、穗重和穗行數(shù)等性狀上面差異顯著，綜合分析農(nóng)藝性狀選出了兩個(gè)優(yōu)良的雜交組合2008060×海92-1(chi)和2008066×海92-