利用無選擇標記表達載體獲得轉(zhuǎn)TPS1基因的百脈根.pdf

1、近年來，非生物脅迫特別是低溫、干旱和鹽害對農(nóng)作物產(chǎn)量的影響日益加重，如何提高農(nóng)作物抵抗不良外界環(huán)境的能力在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上具有重要意義。利用植物分子生物技術(shù)提高植物的抗寒、抗旱和耐鹽能力是近幾年研究的熱點。在幾個關(guān)鍵的逆境因子中，干旱尤其值得重視，因為隨著全球水資源的不斷惡化，干旱問題將會越來越突出，而隨著抗旱新基因的不斷發(fā)現(xiàn)，有關(guān)轉(zhuǎn)化抗旱相關(guān)基因并得到抗性植物的報道越來越多。 在轉(zhuǎn)基因植物中，標記基因常被用于篩選轉(zhuǎn)化細胞或組織，給轉(zhuǎn)

2、基因工作帶來很大方便，但在獲得轉(zhuǎn)基因植物之后，篩選標記基因的存在可能對植物的生長發(fā)育產(chǎn)生不良影響，這也是目前公眾擔心轉(zhuǎn)基因植物安全性的最重要原因。把選擇標記基因去掉，將提高轉(zhuǎn)基因植物的環(huán)境安全性和食用安全性，更易被廣大消費者所接受，也有利于對同一個植物品種進行多次轉(zhuǎn)基因操作。近年來，科學工作者已經(jīng)在建立無選擇標記基因轉(zhuǎn)化系統(tǒng)方面作了大量嘗試，獲得了無標記基因的轉(zhuǎn)基因植物(MFTPs：Marker-Free Transgenic Plan

3、ts)。 本研究中，我們以啤酒酵母基因組DNA為模板，利用PCR的方法從中分離得到與抗旱相關(guān)的海藻糖-6-磷酸合酶(TPS1)基因，以一種可化學誘導的Cre/loxP位點特異性DNA重組體系pX6-GFP載體為基礎(chǔ)，對其進行改造，將其中的綠色熒光蛋白(GFP)基因替換成為TPS1基因，構(gòu)建新的pX6-TPS1載體。利用農(nóng)桿菌介導法將新構(gòu)建的載體pX6-TPS1轉(zhuǎn)入豆科模式植物百脈根中，經(jīng)抗生素篩選后獲得轉(zhuǎn)基因植株。這些植株在5μ