胰淀素對脂肪變性人L-02肝細(xì)胞甘油三酯代謝的影響.pdf

1、胰淀素(Amylin)又稱胰島淀粉樣多肽(islet amyloid polypeptide，IAPP)，由PerWesterwark等于1987年首次在2型糖尿病患者的胰島淀粉樣蛋白沉積及正常胰島細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)，由37個氨基酸組成，與胰島素一起由胰島β細(xì)胞合成與分泌。胰淀素與2型糖尿病關(guān)系密切，不僅參與胰島素抵抗的發(fā)生，并且能與胰島素和胰高血糖素一起調(diào)節(jié)人體血糖平衡。胰淀素還能通過刺激后極區(qū)的特異性胰淀素受體將中央信號傳遞到下丘腦外

2、側(cè)區(qū)和其他下丘腦區(qū)域，增加餐后飽食感而減少進(jìn)食，以及減緩胃排空等。
　　目前關(guān)于胰淀素的研究主要集中在糖代謝上面，對脂代謝作用的研究很少，并且意見不一致。在先前的兩個研究中發(fā)現(xiàn)，胰淀素對大鼠脂肪細(xì)胞的脂肪合成與分解都沒有影響，這就導(dǎo)致產(chǎn)生了一種錯覺，胰淀素對脂代謝沒有直接影響，盡管Suzuki等證明胰淀素對培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞具有促進(jìn)脂肪生成的作用。近年來實驗證明，無論是DIO肥胖大鼠還是瘦HSD大鼠，胰淀素灌注均能引起一定程度的體重

3、減輕（～10％）和甘油三酯含量下降，并且胰淀素與瘦素聯(lián)合使用效果更好，優(yōu)于胰淀素與瘦素單獨使用，Ye等通過實驗證明胰淀素具有促進(jìn)脂肪分解的作用。目前尚不能確定胰淀素對脂質(zhì)代謝的直接影響。甘油三酯是人體內(nèi)含量最多的脂肪，而肝臟是體內(nèi)參與脂質(zhì)代謝的重要場所，肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝紊亂是很多代謝疾病的起始因素，所以本實驗通過構(gòu)建人L-02肝細(xì)胞脂肪變性模型來研究胰淀素對甘油三酯代謝的影響。
　　本研究目的：
　　1.觀察胰淀素對脂肪變性人

4、L-02肝細(xì)胞甘油三酯代謝的影響及其可能機(jī)制。
　　2.觀察胰淀素與瘦素聯(lián)合使用對脂肪變性人L-02肝細(xì)胞甘油三酯代謝的影響及其可能機(jī)制。
　　方法：
　　1.用50％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基孵育人L-02肝細(xì)胞72h，建立肝細(xì)胞脂肪變性模型，并用油紅O染色鑒定。
　　2.實驗分組:正常肝細(xì)胞組、脂肪變性人L-02肝細(xì)胞組、0.01μmol/l胰淀素處理脂肪變性肝細(xì)胞組、0.1μmol/l胰淀素處理脂肪變性肝

5、細(xì)胞組、1μmol/l胰淀素處理脂肪變性肝細(xì)胞組、5μmol/l胰淀素處理脂肪變性肝細(xì)胞組、瘦素處理組和胰淀素+瘦素聯(lián)合處理脂肪變性肝細(xì)胞組。
　　3.油紅O染色、甘油三酯定量檢測試劑盒及熒光定量RT-PCR技術(shù)分別檢測各組肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量及與甘油三酯代謝相關(guān)的脂肪酸合成酶mRNA和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.50％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基孵育人L-02肝細(xì)胞72h，成功建立肝細(xì)胞脂

6、肪變性模型，油紅O染色發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞變大，輪廓不清，胞漿內(nèi)有大量紅色的脂滴。
　　2.脂肪變性人L-02肝細(xì)胞組與正常肝細(xì)胞組相比，胞漿內(nèi)存在大量紅色脂滴，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，脂肪酸合成酶mRNA和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達(dá)增加。
　　3.不同濃度胰淀素處理脂肪變性人L-02肝細(xì)胞組與脂肪變性人L-02肝細(xì)胞組相比，胞漿內(nèi)紅色脂滴數(shù)量明顯減少，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量明顯下降，差異具有統(tǒng)計

7、學(xué)意義(P＜0.05)，脂肪酸合成酶mRNA和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達(dá)有不同程度下降。
　　4.瘦素處理脂肪變性肝細(xì)胞組和胰淀素+瘦素聯(lián)合處理脂肪變性肝細(xì)胞組與脂肪變性肝細(xì)胞組相比，胞漿內(nèi)紅色脂滴數(shù)量明顯減少，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量顯著下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，脂肪酸合成酶mRNA和乙酰輔酶A羧化酶mRNA表達(dá)有不同程度下降。
　　結(jié)論：
　　1.50％胎牛血清孵育正常肝細(xì)胞72h，可成功制備肝細(xì)胞脂肪