IL-1β在犬牙根吸收組織中的表達(dá)及其對(duì)人牙周膜細(xì)胞MMP-1、TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、牙根吸收（RR）是正畸治療中后果較為嚴(yán)重的并發(fā)癥，可稱之為正畸源性牙根吸收[1](OITRR)，不同學(xué)者關(guān)于其發(fā)生率的調(diào)查結(jié)果有一定的差異性，從26％[2]-100％[3]不等，這種差異性與研究者采取的研究方法和測(cè)量方法的差異性有關(guān)。輕度的牙根吸收通常不會(huì)影響牙齒的牢固程度，沒(méi)有自覺(jué)癥狀，但中度、重度的牙根吸收將引起牙齒松動(dòng)，嚴(yán)重影響牙齒的健康，甚至造成牙齒脫落。一些學(xué)者認(rèn)為OITRR是一個(gè)無(wú)菌性炎癥的過(guò)程，具有炎癥的特征[4]。細(xì)胞外

2、基質(zhì)(ECM)是在創(chuàng)建細(xì)胞形態(tài)發(fā)生、發(fā)展的環(huán)境中起重要作用的一種大分子?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）是參與ECM降解的一種蛋白酶。在正常的生理?xiàng)l件下，MMPs的轉(zhuǎn)錄，酶原的活化，與特定細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用均在正常水平，且受內(nèi)源性抑制劑的抑制[5,6]?；|(zhì)金屬蛋白酶抑制劑（TIMPs）是MMPs的特異性抑制劑，抑制MMPs在組織內(nèi)的活性[7,8]。本實(shí)驗(yàn)中我們建立了OITRR動(dòng)物模型，通過(guò)對(duì)根周組織中白細(xì)胞介素1(IL-1β)是否存在特異

3、性高表達(dá)狀況的研究，以分析牙根吸收發(fā)生發(fā)展中所存在的炎癥因子介導(dǎo)機(jī)制；然后又通過(guò)IL-1β對(duì)人牙周膜細(xì)胞(hPDLCs)中MMP-1與TIMP-1mRNA和蛋白表達(dá)的影響研究，分析探討了OITRR發(fā)生的機(jī)制。目的：
　　探討IL-1β與OITRR的關(guān)系，以分析其發(fā)生機(jī)制。
　　方法：
　　建立犬牙根吸收的動(dòng)物模型，刮取根周組織，應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)IL-1βmRNA在根吸收的根周組織與正常根周組織之間表達(dá)的差異性。體外

4、培養(yǎng)hPDLCs，設(shè)立IL-1β工作濃度梯度：0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml，0ng/ml為空白對(duì)照組，時(shí)間梯度：6h、12h、24h，分別運(yùn)用PCR和細(xì)胞免疫熒光化學(xué)方法檢測(cè)IL-1β作用下，hPDLCs中MMP-1、TIMP-1表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1犬牙根周組織中IL-1β表達(dá)情況檢測(cè)
　　PCR電泳結(jié)果顯示，動(dòng)物模型中發(fā)生牙根吸收的根周組織，在250bp（IL-1β引

5、物大小為243bp）的位置有較清晰條帶，但對(duì)照組根周組織未觀察到明顯的電泳條帶，這一結(jié)果提示牙根吸收組根周組織中的內(nèi)源性IL-1βmRNA表達(dá)量高于對(duì)照組。
　　2IL-1β對(duì)hPDLCs中MMP-1、TIMP-1表達(dá)的影響研究
　　2.1MMP-1、TIMP-1mRNA濃度依賴的表達(dá)
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：與對(duì)照組相比，0.01ng/ml與0.1ng/ml組對(duì)MMP-1表達(dá)的影響無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（方差分析，p=0.165，

6、p=0.205）；1ng/ml和10ng/ml組均促進(jìn)MMP-1的表達(dá)(p<0.05)，但這兩組間MMP-1的表達(dá)無(wú)顯著性差異。0.01ng/ml、0.1ng/ml、1ng/ml、10ng/ml濃度組與對(duì)照組相比，TIMP-1的表達(dá)均有下降（p<0.05），且10ng/ml濃度組的TIMP-1的表達(dá)下降程度高于其它濃度組（p<0.05）。這一結(jié)果提示，IL-1β對(duì)hPDLCs中MMP-1表達(dá)有促進(jìn)作用，對(duì)TIMP-1的表達(dá)則有抑制作用，

7、其中10ng/ml濃度組對(duì)MMP-1表達(dá)的促進(jìn)和對(duì)TIMP-1表達(dá)的抑制作用最強(qiáng)。
　　2.2MMP-1、TIMP-1mRNA時(shí)間依賴的表達(dá)
　　以上面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果作為IL-1β濃度選擇依據(jù)，再進(jìn)行了IL-1β作用效應(yīng)的時(shí)間梯度研究：10ng/mlIL-1β刺激hPDLCs，檢測(cè)其MMP-1與TIMP-1表達(dá)的變化，采集時(shí)間點(diǎn)為6h、12h、24h。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明：與對(duì)照組比較，10ng/mlIL-1β刺激后，自12h開(kāi)始，M

8、MP-1的表達(dá)出現(xiàn)上調(diào)情況（p<0.05），且24h組較12h組MMP-1表達(dá)上調(diào)程度更高（p<0.05）。10ng/mlIL-1β刺激6h后hPDLCs中TIMP-1的表達(dá)就開(kāi)始出現(xiàn)抑制情況（p<0.05），隨時(shí)間的延長(zhǎng)，這種抑制作用逐漸增強(qiáng)，24h抑制作用最強(qiáng)（p<0.05）
　　2.3MMP-1、TIMP-1蛋白的表達(dá)
　　濃度為10ng/ml的IL-1β作用24h后，hPDLCs的MMP-1蛋白表達(dá)量高于對(duì)照組，TI