AGEs對人腎小球系膜細(xì)胞MMP-9和TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討糖基化終產(chǎn)物（AGEs）致糖尿病腎?。―N）系膜細(xì)胞外基質(zhì)積聚的可能機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)人腎小球系膜細(xì)胞（HMCs），分別用不同濃度的AGEs作用相同時間或相同濃度的AGEs作用不同時間，MTT法測定各組系膜細(xì)胞的增殖情況；采用RT-PCR法和Western blot分別檢測MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白的表達(dá)，同時觀察AGEs作用下細(xì)胞膜上RAGE的表達(dá)以及p38MAPK磷酸化水平表達(dá)的變化；加入不同濃

2、度的中和性抗RAGE抗體及p38MAPK特異性抑制劑SB203580預(yù)處理系膜細(xì)胞后，Western blot法觀察MMP-9和TIMP-1蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：(1)濃度100～400μg/ml的AGEs作用系膜細(xì)胞24h或濃度200μg/ml的AGEs作用系膜細(xì)胞12～48h后，系膜細(xì)胞出現(xiàn)增殖，且隨著AGEs濃度的升高、作用時間的延長，細(xì)胞增殖愈加明顯。(2)AGEs能夠促進(jìn)HMCs RAGE的表達(dá)及p38MAPK的磷

3、酸化，并以時間和劑量依賴方式誘導(dǎo)HMCs MMP-9的表達(dá)下調(diào)和TIMP-1的表達(dá)上調(diào)，各AGEs處理組與空白對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，AGEs各組間差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P﹤0.05)。(3)不同濃度的抗 RAGE抗體和SB203580預(yù)處理后，與AGEs組比較，MMP-9的表達(dá)上升，TIMP-1表達(dá)下降，作用呈濃度依賴性。
　　結(jié)論：(1)一定濃度和時間范圍內(nèi)，AGEs促進(jìn)人腎小球系膜細(xì)胞增殖。(2)AGEs以濃度和時間依賴方式誘