解脲脲原體生物被膜形成及其耐藥性分析.pdf

1、目的:
　　建立解脲脲原體(Ureaplasma urealytium，UU)生物被膜體外模型，研究UU臨床分離株生物被膜的形成能力、耐藥性及二者之間的關(guān)系。
　　方法:
　　1.采用硅膠片法體外培養(yǎng)解脲脲原體生物被膜。
　　2.采用吉姆薩染色法從形態(tài)學(xué)角度定性分析UU臨床分離株生物被膜的形成能力;通過生物被膜結(jié)晶紫染色法半定量檢測UU臨床分離株生物被膜的形成能力。
　　3.采用實時熒光定量PCR方法檢測生

2、物被膜中UU-DNA的定量值。
　　4.采用微量肉湯稀釋法測定UU臨床分離株在浮游生長狀態(tài)與生物被膜狀態(tài)下對四環(huán)素、紅霉素、克拉霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星的敏感性。
　　5.檢測阿奇霉素單獨(dú)或與加替沙星聯(lián)合用藥對UU臨床菌株生物被膜形成的影響。
　　6.測定黃芩、黃連、黃柏、連翹、赤芍、甘草及芩連膠囊對UU的最小抑菌濃度。
　　結(jié)果:
　　1.以硅膠片為載體，在液體環(huán)境下成功建立了UU生物被膜體外模型。利用

3、顯微鏡觀察到載體表面形成了團(tuán)塊狀及網(wǎng)絡(luò)狀膜樣結(jié)構(gòu)，即生物被膜。
　　2.吉姆薩染色法定性結(jié)果顯示在25株UU臨床分離株中，有20株形成生物被膜，生物被膜形成率為80％(20/25);結(jié)晶紫染色法半定量檢測UU生物被膜的形成能力，其中5株UU的吸光值OD560≤0.15，13株UU的吸光值0.15＜OD560≤0.20，7株UU的OD560＞0.20。
　　3.生物被膜中UU-DNA定量值的對數(shù)值與其OD560成正相關(guān)（r=0

4、.9897）。
　　4.四環(huán)素、紅霉素、克拉霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星對UU的最小生物被膜抑菌濃度均高于相應(yīng)浮游菌的最小抑菌濃度，上述5種藥物在浮游生長狀態(tài)下和生物被膜狀態(tài)下的最小抑菌濃度的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P均＜0.05）。
　　5.0.2 mg/L的阿奇霉素對UU生物被膜的形成具有抑制作用，隨著藥物濃度的升高，抑制作用更加顯著。成熟生物被膜內(nèi)UU-DNA定量值逐漸降低，不同藥物濃度作用下UU-DNA定量值之間的差異有統(tǒng)計

5、學(xué)意義(F=10.066，P＜0.05)。且阿奇霉素與加替沙星聯(lián)用呈協(xié)同抗菌作用，可增強(qiáng)后者對UU生物被膜的滲透性。
　　6.中藥組方芩連膠囊具有較強(qiáng)的抗UU作用:MIC50=0.50mg/mL，MIC90=1.00 mg/mL。
　　結(jié)論:
　　1.臨床分離的UU菌株絕大多數(shù)能夠形成生物被膜。
　　2.硅膠片法體外培養(yǎng)結(jié)合吉姆薩染色法能對UU生物被膜形成能力進(jìn)行定性分析。
　　3.UU生物被膜結(jié)晶紫染液的