氨基胍治療前后糖尿病大鼠視網(wǎng)膜AQP-4表達(dá)變化及其與AGEs的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察糖尿病(diabetes mellitus，DM)大鼠視網(wǎng)膜組織中水通道蛋白（aquaporin，AQP）-4表達(dá)改變，探討糖尿病視網(wǎng)膜病(diabetic retinopathy,DR)是否與體液代謝異常有關(guān)；通過(guò)氨基胍（aminoguanidine，AG）治療前后，D大鼠視網(wǎng)膜AQP-4表達(dá)變化與糖基化終末產(chǎn)物（advanced glycation end products， AGEs）表達(dá)變化的相關(guān)性分析，探討AQP

2、-4表達(dá)改變是否與AGEs異常有關(guān)。
　　方法：選擇清潔級(jí)2月齡雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（200g左右）51只，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、糖尿病組和糖尿病AG治療組3組。一次性腹腔注射鏈脲菌素（streptozotocin,STZ）誘發(fā)糖尿病模型，正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，糖尿病AG治療組在糖尿病動(dòng)物模型建立成功后對(duì)其進(jìn)行灌胃給予AG治療，各組分別于第1個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月取材動(dòng)物視網(wǎng)膜組織。應(yīng)用HE染色方法觀察正

3、常組大鼠和糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織的病理改變；應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色和Western Blot等方法觀測(cè)各組大鼠視網(wǎng)膜組織AQP-4的表達(dá)與變化；應(yīng)用ELISA方法觀測(cè)各組大鼠視網(wǎng)膜組織AGEs的表達(dá)與變化，并分析AQP-4表達(dá)改變與AGEs的相關(guān)性。應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并結(jié)合SPSS17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示。均數(shù)間的比較主要采用t檢驗(yàn)、重復(fù)測(cè)量資料的多變量分析、方差分析和線性相關(guān)分析等。α=0.05為顯著性檢

4、驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:正常對(duì)照組的大鼠隨著飼養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)體質(zhì)量呈上升趨勢(shì)，血糖值維持在正常水平（＜5.7mmol/L）；成功建立糖尿病模型的大鼠體質(zhì)量在12h后開(kāi)始有明顯的下降，血糖值在72 h后均達(dá)到DR模型的標(biāo)準(zhǔn)（＞17.6mmol/L），且隨著DR病程的發(fā)展血糖值都維持在較高水平，與正常對(duì)照組大鼠相比有顯著性差異（P＜0.05）；糖尿病 AG治療組大鼠的體質(zhì)量和血糖值與糖尿病組大鼠相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。
　　

5、糖尿病1個(gè)月大鼠視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)清晰，各種細(xì)胞見(jiàn)明顯形態(tài)結(jié)構(gòu)改變；糖尿病3個(gè)月大鼠視網(wǎng)膜外網(wǎng)層、內(nèi)網(wǎng)層和節(jié)細(xì)胞層結(jié)構(gòu)疏松；糖尿病6個(gè)月大鼠視網(wǎng)膜各層水腫更明顯，病變主要在外網(wǎng)層及內(nèi)網(wǎng)層，節(jié)細(xì)胞層見(jiàn)空泡化改變，內(nèi)核層見(jiàn)較多空泡。
　　在正常對(duì)照組、糖尿病組和糖尿病 AG治療組大鼠的視網(wǎng)膜組織中均可見(jiàn)AGEs與AQP-4的表達(dá)，與正常對(duì)照組大鼠相比，糖尿病組大鼠視網(wǎng)膜組織中，AGEs和AQP-4的表達(dá)均高于正常對(duì)照組，且隨著病程的延長(zhǎng)而

6、增加，在1個(gè)月、3個(gè)月和6個(gè)月時(shí)均有顯著性差異（P＜0.05）；糖尿病AG治療組大鼠血清和視網(wǎng)膜組織中AGEs表達(dá)下調(diào)，與糖尿病組大鼠血清和視網(wǎng)膜組織中AGEs的表達(dá)相比有顯著性差異（P＜0.05），而與正常對(duì)照組大鼠相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；糖尿病 AG治療組大鼠視網(wǎng)膜組織中AQP-4表達(dá)也有所下調(diào)，在1個(gè)月時(shí)，與正常對(duì)照組和糖尿病組大鼠比較有顯著性差異（P＜0.05）；在3個(gè)月時(shí)，與糖尿病組大鼠相比有顯著性差異（P＜0.05

7、），與正常組大鼠相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；在6個(gè)月時(shí)，與糖尿病組大鼠相比有顯著性差異（P＜0.05），與正常組大鼠相比有顯著性差異（0.01＜P＜0.05）；線性相關(guān)分析結(jié)果顯示，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜AQP-4表達(dá)改變與AGEs呈正相關(guān)（r=0.943,P=0.005），治療組大鼠視網(wǎng)膜AQP-4表達(dá)改變與AGEs呈正相關(guān)（r=0.886,P=0.019）。
　　結(jié)論：體液代謝異?？赡茉谔悄虿〈笫笠暰W(wǎng)膜病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮