糖尿病大鼠腎臟AGEs聚集與足細胞損傷相關(guān)性研究.pdf

1、目的:觀察正常大鼠、糖尿病大鼠及糖尿病厄貝沙坦治療大鼠腎臟組織終末糖基化產(chǎn)物(AGEs)的聚集及腎臟足細胞損傷標志蛋白desmin的表達，計數(shù)腎小球足細胞數(shù)目，初步探討腎臟AGEs聚集在足細胞損傷中的作用，及厄貝沙坦對足細胞的保護作用。
　　 方法:健康雄性3月齡Wistar大鼠,30只，平均體重284.03±5.32g，購自山東大學實驗動物中心。所有大鼠給予適應性喂養(yǎng)7天后，隨機取出6只作正常對照組(N組)，予以普通飼料喂養(yǎng);

2、余24只用于制作糖尿病大鼠動物模型，給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，持續(xù)觀察8周。禁食不禁水12h，一次性腹腔注射STZ(30mg/kg)，N組以同等劑量的枸櫞酸鹽緩沖液代替。連續(xù)觀察3周，每周固定時間取鼠尾微量靜脈血測血糖，并行腹腔內(nèi)葡萄糖耐量試驗(IPGTT)，以空腹血糖(FPG)≥7.0mmol/L或糖負荷后2h血糖≥11.1mmol/L者為糖尿病動物模型制作成功大鼠。大鼠造模成功后，隨機分為2組:糖尿病模型對照組(D組)、糖尿病厄貝沙坦治

3、療組(D+Irb組)，厄貝沙坦按50mg/(kg·d)灌服，8周后處死動物。用熒光光譜法分別檢測各組大鼠的血清AGEs及腎臟組織AGEs含量。
　　 方法分別檢測各組大鼠腎臟組織RAGE及desmin的表達，每例切片隨機選取10個視野，高倍鏡(×400)下將圖像捕入MICDAnalysisEvaluation7.0圖像分析軟件系統(tǒng)，測量各組大鼠腎小球RAGE陽性細胞平均光密度值及desmin陽性細胞平均光密度值，同時測量高倍視野

4、下腎小球面積(μm2)，并分別計數(shù)高倍視野下每個腎小球的足細胞數(shù)目。計算出每1000μm2面積內(nèi)腎小球足細胞數(shù)目，取其平均值代表腎小球足細胞數(shù)目。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示。應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，組間均數(shù)之間的比較采用單因素方差分析和LSD-t檢驗。并對大鼠腎臟AGEs含量與血清·AEs、GHbAlc、24hUP、Ccr、腎小球足細胞RAGE陽性細胞平均光密度值、desmin陽性細胞平均光密度值及腎小球足細

5、胞數(shù)進行Pearson相關(guān)性分析，p＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、N組、D組及D+Irb組大鼠腎臟組織AGEs的含量分別為:4.34±0.91、7.46±1.38、8.90±1.04;與N組比較，D組及D+Irb組大鼠的腎臟AGEs含量均顯著增加(p＜0.01)，與D組相比較，D+Irb組大鼠腎臟AGEs含量均顯著降低(p＜0.05);
　　 2、N組、D組及D+Irb組大鼠腎臟RAGE

6、陽性細胞平均光密度值分別為:0.110±0.018、0.257±0.035、0.304±0.047;與N組大鼠比較，D組及D+Irb組大鼠的腎臟RAGE陽性細胞光密度值顯著增高(p＜0.01)，與D組大鼠相比較，D+Irb組大鼠腎臟RAGE陽性細胞光密度值顯著降低(p＜0.05);
　　 3、N組、D組及D+Irb組大鼠腎臟desmin陽性細胞平均光密度值分別為:0.208±0.020、0.243±0.016、0.268±0.0

7、28;與N組大鼠比較，D組及D+Irb組大鼠腎臟desmin陽性細胞光密度值顯著增高(p＜0.01)，與D組大鼠相比較，D+Irb組大鼠腎臟desmin陽性細胞光密度值顯著降低(p＜0.05);
　　 4、N組、D組及D+Irb組大鼠腎小球足細胞數(shù)分別為:11.16±0.89、7.32±0.75、8.40±0.94;與N組大鼠比較，D組及D+Irb組大鼠腎小球足細胞數(shù)目明顯減少(p＜0.01);經(jīng)厄貝沙坦藥物干預后，D+Irb組

8、大鼠腎小球足細胞計數(shù)較D組大鼠明顯增加(p＜0.05);
　　 5、相關(guān)性分析
　　 1)大鼠腎臟AGEs含量與GHbAlc、24hUP、血清AGEs含量，腎臟RAGE陽性細胞平均光密度值及desmin陽性細胞平均光密度值呈顯著正相關(guān)(r=0.813，r=0.887，r=0.930，r=0.839，r=0.787,p均＜0.01)，與Ccr、腎小球足細胞數(shù)成顯著負相關(guān)(r=-0.557，p＜0.01;r=-0.842，p

9、＜0.01);
　　 2)大鼠腎小球足細胞數(shù)與Ccr呈顯著正相關(guān)(r=0.604，p＜0.01)，與24hUP、腎臟AGEs含量、腎臟RAGE陽性細胞平均光密度值及desmin陽性細胞平均光密度值呈顯著負相關(guān)(r=-0.904，r=-0.842，r=-0.778，r=-0.712，p均＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、正常情況下大鼠腎臟組織有少量AGEs聚集，糖尿病環(huán)境可使大鼠腎臟組織AGEs含量明顯增加，

10、經(jīng)厄貝沙坦藥物干預后腎臟組織AGEs含量明顯減少;
　　 2、RAGE及desmin在正常大鼠腎小球均有少量表達，但糖尿病時可使腎臟RAGE及desmin表達明顯增加;糖尿病大鼠經(jīng)厄貝沙坦藥物干預后腎臟RAGE及desmin表達明顯下降;
　　 3、糖尿病環(huán)境使大鼠腎小球足細胞數(shù)顯著減少，厄貝沙坦藥物干預可明顯延緩糖尿病大鼠腎小球足細胞數(shù)量的減少，且腎小球足細胞數(shù)目與腎臟desmin陽性細胞平均光密度值、24hUP呈負相

11、關(guān)，與Ccr呈正相關(guān)。提示糖尿病狀態(tài)時腎小球足細胞數(shù)量的減少是糖尿病腎病的重要發(fā)病機制之一;而desmin作為足細胞損傷的重要標志，其表達量可通過厄貝沙坦藥物干預而降低;
　　 4、腎小球足細胞數(shù)量與腎小球AGEs的聚集、腎臟RAGE的表達強度呈顯著負相關(guān)，提示糖尿病時腎臟AGEs的聚集、腎臟RAGE的表達增強在足細胞的損傷中具有重要作用，厄貝沙坦可通過抑制AGEs在腎臟的聚集以減輕足細胞損傷，從而預防或延緩糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展