氟非尼酮抑制NALP3-IL-1R1-MyD88通路減輕BLM誘導(dǎo)的小鼠肺炎癥及纖維化.pdf

1、目的:
　　探討氟非尼酮(FD)抑制NALP3炎性體和阻斷IL-1R1/MyD88通路的活化，多靶點(diǎn)抑制博來霉素所致小鼠肺纖維化模型的炎癥反應(yīng)，發(fā)揮早期抗肺纖維化作用的機(jī)制。
　　方法:
　　1、80只C57BL/6小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為5組:生理鹽水對照組(Control)、BLM模型組(BLM)、BLM模型組+FD治療組(FD)、BLM模型組+Z-YVAD-FMK治療組(Cp1 inhibitor)、BLM模

2、型組+Anakinet治療組(IL-1Ra)，每組動物16只。
　　2、采用氣管內(nèi)注入BLM（5mg/kg）法復(fù)制小鼠肺纖維化動物模型，分別給予FD(500mg/kg，造模前24小時(shí)灌胃給予，1次/天)、caspase-1抑制劑（YVAD-FMK，10mg/kg，造模前8小時(shí)和4小時(shí)腹腔分別給藥1次）、IL-1R抑制劑(IL-1Ra，100ug，2次/天，造模前24小時(shí)腹腔給予)處理小鼠， BLM處理的第2天和第14天分別處死動物

3、，左肺組織病理切片行HE和Masson染色;右肺組織迅速液氮保存，Real time PCR測定肺組織IL-1β、MCP-1、MPO、IL-6、α-SMA、 Fibronectin、CollagenⅠ mRNA表達(dá)水平;ELISA檢測肺組織勻漿IL-1β、MCP-1、MPO和IL-6蛋白表達(dá)水平;Western blot檢測肺組織caspase-1、IL-1R1、MyD88、α-SMA和Fibronectin蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:

4、
　　1、BLM處理的第2天及14天，BLM模型組肺組織大量的炎性細(xì)胞浸潤，肺泡炎評分明顯高于對照組(P＜0.001);經(jīng)FD、Cp1inhibitor、IL-1 Ra治療后，肺組織中炎性細(xì)胞浸潤明顯減少，肺泡炎評分均顯著下降(P＜0.001)。
　　2、BLM處理的第14天，BLM模型組肺組織見大量的膠原沉積，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺纖維化評分明顯高于對照組(P＜0.001);經(jīng)FD、Cp1 inhibitor、IL-1Ra治療后

5、肺組織中膠原沉積明顯減少，肺纖維化評分均明顯下降(P＜0.001)，治療組之間無顯著性差異。
　　3、BLM處理的第2天和第14天，ELISA和/或Real-time PCR結(jié)果顯示:BLM模型組IL-1β、MCP-1、MPO、IL-6的蛋白和/或mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組(P＜0.001);經(jīng)FD、Cp1 inhibitor、IL-1Ra治療后IL-1β、MCP-1、MPO、IL-6的蛋白和/或mRNA表達(dá)水平顯著下降(P＜

6、0.05);FD對IL-6的蛋白抑制作用強(qiáng)于Cp1inhibitor(P＜0.05)。
　　4、BLM處理的第14天，Western Blot和/或Real-time PCR結(jié)果顯示:BLM模型組α-SMA、Fibronectin、CollagenⅠ的蛋白和mRNA表達(dá)水平明顯高于對照組(P＜0.01);經(jīng)FD、Cp1 inhibitor、IL-1Ra治療后α-SMA、 Fibronectin、CollagenⅠ的蛋白和mRNA表

7、達(dá)水平顯著下降(P＜0.05)，F(xiàn)D對α-SMA、 Fibronectin的蛋白抑制作用強(qiáng)于Cp1 inhibitor(P＜0.05)。
　　5、BLM處理的第2天及14天，Western blot結(jié)果顯示:BLM模型組活性的caspase1、IL-1R1、MyD88蛋白表達(dá)水平明顯高于對照組(P＜0.001);經(jīng)FD、Cp1 inhibitor治療后活性的caspase1蛋白表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01)，兩治療組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差

8、異;經(jīng)FD、IL-1Ra治療后IL-1R1、MyD88蛋白表達(dá)水平顯著下降(P＜0.01)，兩治療組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;而經(jīng)IL-1Ra不能抑制活性的caspase1蛋白表達(dá)(P＞0.05)，經(jīng)Cp1 inhibitor不能降低IL-1R1、MyD88蛋白表達(dá)水平(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、氟非尼酮可以減輕BLM誘導(dǎo)的小鼠早期肺炎癥及纖維化。
　　2、氟非尼酮抑制NALP3/IL-1R1/MyD88通路減輕BL