2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  探討一種新型活性化合物,7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀異黃素(7-difluoromethoxy-5,4'-dimethoxygenistein,DFMG),是否通過抑制TLR4-MyD88信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路拮抗溶血性磷脂酰膽堿(lysophosphatidylcholine,LPC)誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC-12)氧化應(yīng)激損傷。
  方法:
  體外培養(yǎng)HUVEC-12細(xì)胞,TLR4-cDNA

2、質(zhì)粒和TLR4-shRNA質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h得到TLR4過表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞和TLR4沉默HUVEC-12細(xì)胞。用RT-qPCR和Western blotting鑒定是否分別成功過表達(dá)和沉默TLR4。用30μmol/L的LPC處理以上兩種細(xì)胞24 h,然后加入3.0μmol/L的DFMG孵育24h。應(yīng)用ELISA分析DFMG對LPC誘導(dǎo)損傷的HUVEC-12細(xì)胞TLR4-MyD88通路途徑中IL-6、TNF-α的影響,采用We

3、stern blotting檢測DFMG對于LPC誘導(dǎo)損傷的HUVEC-12細(xì)胞TLR4-MyD88通路途徑中TLR4、MyD88的影響。
  結(jié)果:
 ?、賂LR4-cDNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,相對于空白對照組,熒光定量PCR結(jié)果顯示TLR4過表達(dá)組細(xì)胞的TLR4基因表達(dá)增加(P<0.01),Westernblotting結(jié)果顯示TLR4過表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞的TLR4蛋白表達(dá)增加。TLR4-shRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,相對于空白對

4、照組,熒光定量PCR結(jié)果顯示TLR4沉默HUVEC-12細(xì)胞的TLR4基因表達(dá)明顯降低,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。Western blotting結(jié)果顯示TLR4沉默HUVEC-12細(xì)胞的TLR4蛋白表達(dá)明顯降低。驗證TLR4-cDNA質(zhì)粒和TLR4-shRNA質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染后獲得TLR4過表達(dá)HUVEC-12細(xì)胞和TLR4沉默HUVEC-12細(xì)胞。
 ?、贓LISA結(jié)果顯示:LPC損傷組、TLR4過表達(dá)組和TLR4過表達(dá)

5、+LPC損傷組的IL-6、TNF-α分泌量相對空白對照組均明顯上升(P<0.05),其中TLR4過表達(dá)+LPC損傷組增高最為顯著(P<0.05)。TLR4沉默組和TLR4沉默+LPC損傷組的IL-6、TNF-α分泌量較LPC損傷組均明顯下降(P<0.05)。TLR4過表達(dá)+LPC損傷+DFMG組的IL-6、TNF-α表達(dá)量與TLR4過表達(dá)+LPC損傷組比較顯著下降(P<0.05)。TLR4沉默+LPC損傷+DFMG組的IL-6、TNF-

6、α表達(dá)量與TLR4沉默+LPC損傷組和LPC損傷組比較均明顯下降(P<0.05)。DFMG組的IL-6、TNF-α分泌量同空白對照組相當(dāng),差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
  ③Western blotting結(jié)果顯示:LPC損傷組、TLR4過表達(dá)組和TLR4過表達(dá)+LPC損傷組的TLR4、MyD88蛋白表達(dá)量相對空白對照組有所上升,其中TLR4過表達(dá)+LPC損傷組上升最為明顯。TLR4沉默組和TLR4沉默+LPC損傷組所表達(dá)的

7、TLR4、MyD88蛋白相對于LPC損傷組明顯下降。TLR4過表達(dá)+LPC損傷+DFMG組的TLR4、MyD88蛋白表達(dá)量與TLR4過表達(dá)+LPC損傷組比較顯著下調(diào)。而TLR4沉默+LPC損傷+DFMG組比TLR4沉默+LPC損傷組和LPC損傷組的TLR4、MyD88蛋白量都明顯減少。DFMG組的TLR4、MyD88蛋白表達(dá)量與空白對照組差異不明顯。
  結(jié)論:
 ?、賂LR4-MyD88信號通路介導(dǎo)LPC誘導(dǎo)的HUVEC-

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