阿膠強骨口服液對去卵巢大鼠骨質疏松模型治療作用的實驗研究.pdf

1、目的：觀察阿膠強骨口服液對去卵巢大鼠骨質疏松的影響及機制，并探討阿膠強骨口服液對絕經后骨質疏松的治療作用。
　　 方法：(1)六月齡雌性SD大鼠16只，適應性飼養(yǎng)一周后，隨機分為二組：假手術組和去卵巢組，每組8只。3個月后取材檢測：兩側股骨，常規(guī)HE染色，光鏡下觀察骨組織結構；使用雙能X線骨密度儀測量大鼠股骨頭及粗隆部BMD；生物力學測定儀上測定最大載荷和最大壓應變。(2)6月齡SD大鼠36只，隨機分為A組，B組，C組，每組12

2、只。6個月后取材檢測。采用ELISA法對去卵巢大鼠血清25-OH-VD3和1,25-(OH)2-VD3進行研究，用熒光定量PCR對腎臟VDR基因進行定量分析。(3)6月齡SD大鼠36只，隨機分為A組，B組，C組，每組12只。6個月后取材檢測。采用熒光定量PCR對I型膠原基因進行定量分析，采用免疫印跡法對I型膠原蛋白進行分析。(4)六月齡雌性SD大鼠16只，其中12只用于灌胃制備含藥血清和對照血清，4只用于提取細胞。將細胞分為兩組，即含藥

3、血清組和對照血清組。M組的細胞用含藥血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，C組的細胞用對照血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，兩組中均加入25ng/ul的M-CSF和RANKL各1ul。分別取干預一周的兩組細胞進行TRAP染色。采用噻唑鹽比色法測增殖情況。通過Annexin V聯合PI試劑盒采用流式細胞儀檢測細胞凋亡率。
　　 結果：(1)造模情況：1. 假手術組大鼠股骨骨小梁豐富、連續(xù)、致密；去卵巢組大鼠骨小梁排列稀疏、部分斷裂、骨小梁平均寬度變小、骨小梁間距增大。平

4、均骨小梁寬度：假手術組為71.23±10.62，去卵巢組為52.65±12.17，統(tǒng)計學有顯著性差異；平均骨小梁間距：假手術組為83.68±3.69，去卵巢組為105.32±3.55，統(tǒng)計學有顯著性差異；2. 假手術組和去卵巢組大鼠股骨頭生物力學結果：最大壓應力：假手術組為345.87±32.16，去卵巢組為266.13±30.05，統(tǒng)計學有顯著性差異；最大載荷：假手術組為39.13±4.28，去卵巢組為32.39±4.37，統(tǒng)計學有顯

5、著性差異；3.股骨頭骨密度：假手術組為0.316±0.015，去卵巢組為0.281±0.017，統(tǒng)計學有顯著性差異。(2)C組血液中25-羥基維他命D3 濃度和1，25-羥基維他命D3濃度與B組比較明顯增高，其中對25-羥基維他命D3濃度增高尤為明顯，已接近A組，差異有明顯的統(tǒng)計學意義。B組與C組相比，說明擴增效率的差異有明顯的統(tǒng)計學意義。(3)C組I型膠原蛋白與B組比較明顯增高，已接近A組，差異有明顯的統(tǒng)計學意義。I型膠原基因熒光定量

6、PCR結果,B組與C組相比，說明擴增效率的差異有明顯的統(tǒng)計學意義。(4)1.破骨細胞形態(tài)學觀察：破骨細胞胞漿飽滿，內含許多空泡結構，核大呈圓形，核仁清晰?？梢娚倭咳诤霞毎?，含有幾個胞核，胞體大，胞漿豐富；2. TRAP染色結果顯示破骨細胞胞漿陽性，呈酒紅色，核呈陰性；3.阿膠強骨口服液對破骨細胞增殖率的影響：OD值值分別為0.1825±0.03641和0.1819±0.03532，統(tǒng)計學上無顯著性差異；4.阿膠強骨口服液對破骨細胞凋亡率

7、的影響：凋亡率分別為89.51±1.62%和63.79±0.87％，統(tǒng)計學上有顯著性差異。
　　 結論：(1)實驗SD大鼠，在摘除雙側卵巢3月后成功復制出了絕經后骨質疏松癥模型。(2)阿膠強骨口服液可以增加去卵巢大鼠血液中25-OH-VD3、1,25-(OH)2-VD3的濃度，同時上調骨骼中VDR的表達水平。(3)阿膠強骨口服液可以上調骨組織Ⅰ型膠原mRNA的表達水平，同時顯著提高Ⅰ型膠原蛋白表達含量，這是阿膠強骨口服液治療骨質