多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留病變.pdf

1、目的：建立一種兩組四色單克隆熒光抗體組合應(yīng)用多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留病變的敏感、快速、經(jīng)濟的方法。同時對一定數(shù)量的標本進行檢測。對接受檢測的患者進行隨訪。分析其預(yù)后與檢測結(jié)果之間的關(guān)系。從而探討該方法用于檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留病變的應(yīng)用價值。
　　 方法：采用兩組四色熒光標記單克隆抗體組合(CD45/CD20/CD10/CD19，CD45/CD20/CD34/CD19)檢測22名急性B淋巴細胞白

2、血病患者25例骨髓標本。所有骨髓標本均來源于2010年9月至2011年2月河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液內(nèi)科及兒科住院和門診患者，均經(jīng)過骨髓形態(tài)學(xué)及流式細胞術(shù)免疫分型確診，并經(jīng)過VCDLP方案誘導(dǎo)緩解（年齡未滿18周歲患者經(jīng)過VDLP方案誘導(dǎo)緩解）及強化治療。其中男性患者11名，女性患者11名，年齡為2歲至60歲，平均年齡為20歲。以選定的兩組抗體組合應(yīng)用多參數(shù)流式細胞術(shù)對患者誘導(dǎo)緩解及強化治療后的骨髓標本進行檢測。根據(jù)是否可以檢測到存在表達

3、異常免疫表型組合的細胞群，將25例標本分為A、B、C三組。A組為可以檢測出存在異常免疫表型組合細胞群的骨髓標本，即微小殘留病變陽性者；B組為不能檢測到存在異常免疫表型組合細胞群的骨髓標本，即微小殘留病變陰性者；C組為可檢測到原始細胞但未檢測到異常免疫表型的骨髓標本。分別對A、B兩組患者的骨髓涂片進行形態(tài)學(xué)檢查，記錄骨髓涂片原、幼淋巴細胞百分比，并對A、B兩組患者的骨髓涂片結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，比較兩組患者的骨髓涂片原、幼淋巴細胞百分比是否

4、存在統(tǒng)計學(xué)差異。對所有患者進行隨訪，并監(jiān)測骨髓象，了解患者是否復(fù)發(fā)以及復(fù)發(fā)的時間。
　　 結(jié)果：
　　 1、檢測結(jié)果：應(yīng)用選定的兩組單克隆抗體組合(CD45/CD20/CD10/CD19，CD45/CD20/CD34/CD19)對22名患者25例骨髓標本進行檢測，發(fā)現(xiàn)其中12份標本可以檢測到異常細胞群，微小殘留病變結(jié)果分別為0.009％，0.026％,0.030％,0.060％,0.063％,0.068％,0.080％,

5、0.096％,0.137％,0.230％，0.230％，0.270％。另有7份標本可發(fā)現(xiàn)表達CD34等原始細胞的標記即存在一定數(shù)量的原始細胞，但這部分原始細胞未發(fā)現(xiàn)異常的免疫表型，需要與正常存在的原始細胞相鑒別，不能確定為異常細胞群。其余6份標本未檢測到白血病微小殘留病變及原始細胞群，微小殘留病變呈陰性。
　　 2、最常出現(xiàn)的異?？贵w組合：6例標本出現(xiàn)CD45dim/CD20+/CD10+/CD34+/CD19+，出現(xiàn)該異常免疫

6、表型的標本最多。
　　 3、與形態(tài)學(xué)方法的比較：在12份存在異常細胞群，經(jīng)多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測微小殘留病變呈陽性的骨髓標本中，形態(tài)學(xué)檢測骨髓涂片原始、幼稚淋巴細胞百分比之和分別為2％、3％、3％、4％、1％、3％、2％、3％、4％、3％、7％、5％，計算均數(shù)±標準差為3.33％±0.449％，6份標本經(jīng)過多參數(shù)流式細胞術(shù)檢測微小殘留病變呈陰性，未檢測到異常細胞群的標本，形態(tài)學(xué)檢測骨髓涂片原始、幼稚淋巴細胞百分比之和分別為0％、2

7、％、1％、2％、3％、1％，均數(shù)±標準差為1.50％±0.428％。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析可以發(fā)現(xiàn)A組患者骨髓涂片原始、幼稚淋巴細胞數(shù)百分比之和明顯高于B組患者(P＜0.05)。
　　 4、MRD與白血病復(fù)發(fā)的關(guān)系：對這22位患者進行隨訪發(fā)現(xiàn)A組患者中有2例在檢測微小殘留病變呈陽性后2個月內(nèi)復(fù)發(fā)，B組患者至今尚無一人復(fù)發(fā)。對于檢測中發(fā)現(xiàn)存在原始細胞而未發(fā)現(xiàn)該原始細胞表達白血病相關(guān)免疫表型的異常細胞群的7位患者，目前為止有2例形態(tài)學(xué)復(fù)發(fā)。<

8、br>　　 5、復(fù)發(fā)患者的MRD值與緩解期患者MRD值比較：1例已持續(xù)緩解4年2個月患者在本次檢測時骨髓達形態(tài)學(xué)復(fù)發(fā)，原始、幼稚淋巴細胞比例為7％，其MRD值為0.23％。
　　 結(jié)論：
　　 1、應(yīng)用兩組四色熒光標記單克隆抗體組合(CD45/CD20/CD10/CD19;CD45/CD20/CD34/CD19)通過流式細胞術(shù)檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留病變的方法與形態(tài)學(xué)檢測骨髓涂片原始、幼稚淋巴細胞百分比的方法具

9、有較好的一致性。形態(tài)學(xué)的方法不能評價預(yù)后以及預(yù)測復(fù)發(fā)，而流式細胞術(shù)的方法可以用來檢測急性B淋巴細胞白血病微小殘留病變，且具有檢測速度快、靈敏度高、方法簡便、便于監(jiān)測、經(jīng)濟等優(yōu)點，可以提早預(yù)測復(fù)發(fā)，從而可以根據(jù)檢測結(jié)果確定個體化的治療方案為患者及早進行強化治療避免復(fù)發(fā)爭取了時間。
　　 2、對于本方法可以檢測到表達CD34等較原始的細胞標志的原始細胞，而不能確定所檢測到的原始細胞是否表達白血病相關(guān)免疫表型，而無法確定為異常細胞群的