松果體及褪黑素對大鼠胸腺trkB表達的影響.pdf

1、目的：研究松果體摘除及補充褪黑素對大鼠胸腺trkB表達的影響，探討褪黑素阻止大鼠胸腺細胞凋亡是否通過調(diào)節(jié)trkB起作用；進一步了解松果體及褪黑素對trkB的影響是通過胸腺細胞直接起作用還是巨噬細胞間接起作用，或是二者共同作用。從而豐富神經(jīng)一內(nèi)分泌一免疫網(wǎng)絡(luò)學說。 方法：①建立松果體摘除動物模型：選用2月齡雄性清潔級SD大鼠110只，分為正常對照組、假手術(shù)對照組、松果體摘除組、松果體摘除+褪黑素腹腔注射7．5mg·kg-I·day

2、-I組和松果體摘除+褪黑素腹腔注射15mg·kg-I．day-1組，術(shù)后4、8周取材，松果體摘除組動物腹腔注射等量生理鹽水。②應用RT-PCR方法及凝膠成像分析系統(tǒng)觀察分析松果體摘除及補充外源性褪黑素后胸腺trkBmRNA量的變化；③應用免疫組織化學染色法和圖像分析軟件觀察分析松果體摘除及補充外源性褪黑素后胸腺trkB陽性細胞的變化；④應用trkB和EDl免疫熒光雙標染色和共聚焦激光掃描顯微鏡觀察并分析松果體摘除及補充外源性褪黑素后胸腺

3、雙陽性細胞的變化。 結(jié)果：①與正常組、假手術(shù)對照組相比，松果體摘除后大鼠胸腺半定量RT-PCR的結(jié)果示trkBmRNA明顯降低，提示松果體摘除后胸腺trkBmRNA的表達減弱，補充褪黑素后有所恢復，術(shù)后8周時高劑量組大鼠胸腺trkBmRNA的表達與正常對照組無明顯差異；②與正常組、假手術(shù)對照組相比，松果體摘除后大鼠胸腺trkB免疫組化的結(jié)果顯示陽性細胞數(shù)降低、陽性面積減少，提示松果體摘除后胸腺trkB的蛋白水平表達減弱，松果體摘

4、除大鼠補充褪黑素后，胸腺trkB陽性細胞數(shù)呈時間依賴性恢復，術(shù)后8周低劑量組恢復正常，而trkB陽性面積在松果體摘除術(shù)后4周低劑量組就恢復正常。各組平均灰度無明顯差異；③與正常組、假手術(shù)對照組相比，松果體摘除術(shù)后4周胸腺trkB與EDl免疫熒光雙標染色結(jié)果顯示雙陽性細胞數(shù)降低、陽性面積減少，提示松果體摘除后胸腺trkB+ED1+巨噬細胞表達減弱，補充褪黑素后無變化，無論低、高劑量組均無法恢復正常。術(shù)后8周松果體摘除組與對照組相比上述指標

5、均無明顯差異，而低劑量組雙陽性細胞表達異常增高，高劑量組恢復正常。各組平均灰度無明顯差異。 結(jié)論：松果體及褪黑素在影響胸腺細胞分化發(fā)育過程中，胸腺表達的trkB隨之發(fā)生變化，松果體摘除導致大鼠胸腺表達總的trkB合成和釋放減少，而補充外源性褪黑素后能逆轉(zhuǎn)上述異常。其間胸腺巨噬細胞表達的trkB也受松果體及褪黑素影響，其與胸腺細胞表達的trkB共同作用參與胸腺細胞分化發(fā)育。胸腺神經(jīng)內(nèi)分泌微環(huán)境的分泌調(diào)節(jié)是松果體及褪黑素保護胸腺細胞