松果體及其褪黑素對大鼠胸腺上皮細胞IL-7表達的影響.pdf

1、目的 通過研究松果體摘除和補充褪黑素，以及體外褪黑素干預對大鼠胸腺上皮細胞表達IL-7的影響，探索松果體褪黑素影響胸腺細胞分化發(fā)育的機制，進一步揭示松果體褪黑素與胸腺的關(guān)系，從而豐富人類對神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)的認識。 方法 ①消化法原代培養(yǎng)大鼠胸腺基質(zhì)細胞，差數(shù)貼壁和差別消化法純化出胸腺上皮細胞，應用廣譜角蛋白抗體做免疫細胞化學染色進行鑒定； ②運用MTT法觀察褪黑素干預對體外培養(yǎng)胸腺上皮細胞生長的影響

2、，半定量RT-PCR法觀察胸腺上皮細胞經(jīng)褪黑素干預后IL-7mRNA表達的變化； ③建立松果體摘除動物模型：選用2月齡雄性清潔級SD大鼠110只，分為正常對照組、假手術(shù)對照組、松果體摘除組、松果體摘除+褪黑素腹腔注射7．5mg·kg-1·day-1組和松果體摘除+褪黑素腹腔注射15mg．kg-1·day-1組，松果體摘除組動物腹腔注射等量生理鹽水，術(shù)后4、8周取材。 ④運用免疫組織化學法和半定量RT-PCR法觀察松果體摘

3、除及補充褪黑素后，大鼠胸腺上皮細胞IL-7表達的變化。 結(jié)果 ①體外培養(yǎng)和純化的胸腺基質(zhì)細胞經(jīng)鑒定證明90％以上為胸腺上皮細胞； ②褪黑素干預對大鼠胸腺上皮細胞的生長沒有顯著影響，但能使IL-7mRNA的表達水平明顯升高，且呈劑量依賴性； ③松果體摘除后大鼠胸腺IL-7免疫組化和RT-PCR的結(jié)果與假手術(shù)對照組相比無顯著差別； ④與對照組相比，松果體摘除大鼠補充高劑量褪黑素4W后，免疫組化結(jié)果顯示