土壤頡頏芽孢桿菌的分離篩選及發(fā)酵初步研究.pdf

1、芽孢桿菌是一群好氧或兼性厭氧、產(chǎn)芽孢的革蘭氏陽性桿菌的總稱，種類多、數(shù)量大，分布極其廣泛，其生理特征豐富多樣，是土壤和植物體表根際的重要微生物種群。由于芽孢桿菌具有內(nèi)生芽孢、抗逆性強、繁殖速度快、營養(yǎng)要求簡單和易于在植物根圍定殖的特點，使其在植物病害生物防治中被廣泛地研究和利用。 本研究旨在從植物根際土壤中分離出對多種植物病原真菌具有強頡頏作用的芽孢桿菌，對菌株進行鑒定、發(fā)酵優(yōu)化，并研究其抑菌機理，以探求用于植物病害生物防治的新

2、資源。 本試驗采用把土壤懸浮液在80℃處理10 min的方法，從采來的土樣中共分離到142株芽孢桿菌。經(jīng)過皿內(nèi)對峙初步篩選出原始菌株1 2株，再通過無菌發(fā)酵濾液復(fù)篩得到一株對稻瘟病菌，小麥赤霉病菌，黃瓜枯萎病菌，梨黑星病菌，煙草赤星病菌，番茄灰霉病菌均具有強頡頏作用的芽孢桿菌B-Q2，對其進行單孢分離并測定單孢頡頏性，結(jié)果表明B-Q2-7的抑菌活性最強，對稻瘟病菌和番茄灰霉病菌抑制效果最好，抑制率分別達到87.04％和90.6％

3、。最終確定B-Q2-7為最優(yōu)菌株。 依據(jù)B-Q2-7菌株的培養(yǎng)特征、形態(tài)學(xué)特征以及生理生化特征，并參照相關(guān)文獻初步鑒定其屬于芽孢桿菌屬的地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。 溫室盆栽實驗結(jié)果顯示B-Q2-7無菌發(fā)酵濾液對番茄灰霉病具有良好的預(yù)防和治療作用，10倍液的預(yù)防效果和治療效果分別達到了89.6％和80.4％，250倍液的預(yù)防和治療效果也在60％以上。 運用單因素分析法和復(fù)合因素分

4、析方法(正交設(shè)計)對菌株B-Q2-7進行了發(fā)酵優(yōu)化，確定了其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方和最佳發(fā)酵培養(yǎng)條件。最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖1.2％+蔗糖0.6％+淀粉1.2％，豆餅粉3％，酵母粉0.3％，K<,2>HPO<,4>·3H<,2>O0．2％；發(fā)酵條件優(yōu)化結(jié)果表明：菌株B-Q2-7在發(fā)酵時間為36h，發(fā)酵培養(yǎng)基初始PH值8.0．培養(yǎng)溫度36℃，搖瓶轉(zhuǎn)速150 r/min時，菌體代謝更旺盛，抑菌效果最好。 B-Q2-7菌株抑菌機理初