動(dòng)物益生芽孢桿菌菌株的篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化研究.pdf

1、益生菌(probiotics)是一種能夠直接飼喂，并且可以通過(guò)改善寄主腸道菌群平衡而對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生有益作用的活的微生物飼料添加劑。近年來(lái)由于抗生素的濫用引起的毒性、藥物殘留，耐藥性，環(huán)境污染等問(wèn)題劇增，給人類(lèi)的生存和發(fā)展造成嚴(yán)重的負(fù)面影響。因此尋找安全、無(wú)毒的抗生素替代品顯得尤為重要。長(zhǎng)期的實(shí)踐和大量研究表明，作為動(dòng)物微生態(tài)制劑的一種，芽孢桿菌不僅能抑制動(dòng)物腸道內(nèi)的病原菌，還能夠產(chǎn)生多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)維持動(dòng)物機(jī)體正常的生理狀態(tài)和生長(zhǎng)繁殖都有重

2、要意義。 本研究根據(jù)益生菌篩選的常規(guī)方法和芽孢桿菌的判定標(biāo)準(zhǔn)，從健康動(dòng)物腸道中分離出680株芽孢桿菌進(jìn)行篩選。經(jīng)過(guò)耐膽酸鹽試驗(yàn)結(jié)果有75株能夠在含0.3％(w/v)的牛膽酸鹽培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，75株芽孢桿菌中有16株能夠抑制大腸桿菌，其中有6株能同時(shí)抑制腸炎沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌。對(duì)它們?cè)龠M(jìn)行耐膽酸鹽復(fù)篩試驗(yàn)，獲得4株芽孢桿菌。經(jīng)過(guò)胃液、腸液、產(chǎn)酶試驗(yàn)得到一株具有優(yōu)良性狀的芽孢桿菌B544。該菌株在pH值為2.0的模擬胃液中2h存

3、活率為21％；4h存活率為5％；在pH值為3.0、pH值為4.0的胃液中能夠緩慢生長(zhǎng)。在模擬腸液中生長(zhǎng)幾乎不受抑制。該菌株還具有產(chǎn)淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶的能力。 通過(guò)培養(yǎng)特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析對(duì)菌株B544進(jìn)行菌種鑒定，初步確定為枯草芽孢桿菌命名為Bacillus spp．544。 經(jīng)培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基優(yōu)化試驗(yàn)，初步確定此菌株培養(yǎng)條件為：起始pH值為7.0～7.3，裝液量40mL/300mL，種子液培