尿毒癥血清和不同血液透析液對脂肪細(xì)胞凋亡及胰島素抵抗的影響.pdf

1、目的：在國內(nèi)，常規(guī)血液透析液（conventional dialysate，CD）因其價(jià)格低廉，被廣泛用于臨床血液透析（hemodialysis，HD）中。然而，這種透析液可以增加血透患者細(xì)菌污染的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致多種遠(yuǎn)期并發(fā)癥。脂肪組織分布異常被認(rèn)為是尿毒癥患者血管疾病的危險(xiǎn)因素。在HD患者中存在逆流行病學(xué)觀點(diǎn)：即與低體質(zhì)量患者相比，肥胖或較高體質(zhì)量指數(shù)患者的病死率較低。已經(jīng)商品化的高純透析液（high purity dialysate ，

2、HPD）可以減少HD患者炎癥反應(yīng)，改善其營養(yǎng)狀況。但是血透液對脂肪細(xì)胞的影響尚不清楚。本次研究主要在體外探討不同微生物純度的血透液對脂肪細(xì)胞凋亡及胰島素抵抗的影響。
　　 方法：分別用尿毒癥患者血清（Uremic Serum）聯(lián)合CD及HPD對經(jīng)體外誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，48h后收集細(xì)胞，Hoechst 33258染色觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變；流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC+碘化丙啶（PI）雙染檢測脂

3、肪細(xì)胞凋亡。PCR檢測CD和HPD中細(xì)菌DNA表達(dá)。ELISA法檢測血清中腫瘤細(xì)胞壞死因子α（TNF-α）水平。葡萄糖酶氧化法檢測細(xì)胞上清的糖消耗，Western Blot技術(shù)檢測胰島素底物受體IRS-1、IRS-2、IRS-1絲氨酸磷酸化的蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)采用的透析液樣品皆取自透析器入口處。
　　 結(jié)果：兩組血液透析液在透析器入口的內(nèi)毒素含量相似，與HPD組（7±3CFU/ml）相比，CD組細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)較高(66±6CFU/ml

4、)，兩組差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。PCR檢測顯示，HPD中細(xì)菌DNA灰度表達(dá)少于CD（p<0.05）。尿毒癥血清（Uremic Serum）與兩種血透液聯(lián)合干預(yù)48h后，Uremic Serum+CD組脂肪細(xì)胞上清中TNF-α水平明顯高于Uremic Serum+HPD組（15.17±2.89 vs 8.12±0.54 pg/ml，p<0.0001），而脂肪細(xì)胞凋亡率Uremic Serum+CD組明顯高于Uremic Se

5、rum+HPD組（p<0.05），且此組細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變。同Uremic Serum+CD組相比，Uremic Serum+HPD組的IRS-1蛋白表達(dá)增強(qiáng)，IRS-1絲氨酸磷酸化表達(dá)減弱，IRS-2蛋白的表達(dá)也下降。
　　 結(jié)論：CD和Uremic Serum聯(lián)合干預(yù)可以誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞凋亡，增加脂肪細(xì)胞的胰島素抵抗，并且可以增加炎癥因子TNF-α的分泌。以上結(jié)果提示：HPD在減少脂肪細(xì)胞凋亡，減輕胰島素抵抗及改善炎癥