半乳糖血癥患兒尿液氣相色譜—質(zhì)譜分析研究.pdf

1、目的: 1.建立尿素酶前處理尿液氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(Gaschromatography-Massspectrometry，GC-MS)分析方法。 2.比較半乳糖血癥患兒治療前后尿中代謝產(chǎn)物與正常健康兒童、酪氨酸血癥患兒及病毒性肝炎患兒的差別，建立半乳糖血癥的尿GC-MS診斷方法。 方法: 1.留取已明確診斷的5例多種羧化酶缺乏癥和30例正常健康兒童尿液作為實驗敏感性測試標本。 2.留取已診斷的2

2、例半乳糖血癥患兒治療前尿液，1例分裝成12份作為日問重復試驗測試標本(每日檢測1份)；1例分裝成10份作為日內(nèi)重復試驗測試標本(同1日檢測)。 3.留取10例半乳糖血癥患兒治療前后、2例酪氨酸血癥患兒、10例病毒性肝炎患兒和60例正常健康兒童尿液標本。 4.尿液采用尿素酶去尿素，吹干、衍生化后進行GC-MS檢測。 5.應用質(zhì)譜儀檢索NIST圖譜庫定性檢測到的尿液代謝產(chǎn)物。 3.以正十七烷酸作為內(nèi)標物質(zhì)，應

3、用內(nèi)標法以內(nèi)生肌酐定量代謝產(chǎn)物。 結(jié)果: 1.5份多種羧化酶缺乏癥患兒尿液均檢出3-甲基巴豆酰甘氨酸，30份正常健康兒童尿液無1例檢出。 2.12份同1例半乳糖血癥患兒尿液半乳糖醇檢測結(jié)果最低為118.3mmol/mol肌酐，最高為151.6mol/mol肌酐，平均為134.3±9.2mmol/mol肌酐，日間變異系數(shù)為6.87％，10份同1例半乳糖血癥患兒尿液半乳糖醇檢測結(jié)果最低為201.2mmol/mol肌酐

4、，最高為264.6mmol/mol肌酐，平均值為228.2±23.2mmol/mol肌酐，日內(nèi)變異系數(shù)為10.17％。 3.10例半乳糖血癥患兒治療前尿中可檢出至少34種以上代謝產(chǎn)物，酪氨酸、4-羥基苯乙酸、4-羥基苯乳酸、半乳糖、半乳糖醇、半乳糖酸和假尿嘧啶7種代謝產(chǎn)物明顯高于正常對照組(P＜0.05)，其中半乳糖、半乳糖醇和半乳糖酸分別為925.34(10.23～3906.77)mmol/mol肌酐、727.05(99.69

5、～4414.74)mmol/mol肌酐和302.76mmol/mol(89.15～685.19)肌酐，而正常對照組(0～95位百分位數(shù))分別為150.54(測不出～806.97)mmol/mol肌酐、10.64(測不出～92.67)mmol/mol肌酐和63.60(測不出～177.39)mmol/mol肌酐。β-氨基異丁酸和二氫尿嘧啶則明顯低于正常對照組(P＜0.05)；治療后除4-羥基苯乳酸外，增多的代謝產(chǎn)物均下降至正常水平。

6、 4.酪氨酸血癥患兒與病毒性肝炎患兒尿中也可檢出酪氨酸、4-羥基苯乙酸、4-羥基苯乳酸、半乳糖、半乳糖醇和半乳糖酸，但與酪氨酸血癥患兒比較，半乳糖血癥患兒尿中酪氨酸較原發(fā)性酪氨酸血癥患兒低(P＜0.05)，半乳糖醇、半乳糖酸則明顯高于原發(fā)性酪氨酸血癥患兒(均P＜0.05)，與病毒性肝炎患兒比較，半乳糖血癥患兒尿液中4-羥基苯乙酸、4-羥基苯乳酸、半乳糖醇、半乳糖酸均明顯高于病毒性肝炎患兒(均P＜0.05)。 結(jié)論: 1.