芐嘧磺隆多克隆抗體的制備.pdf

1、芐嘧磺隆是20世紀(jì)80年代杜邦公司開(kāi)發(fā)的一種新型磺酰脲類(lèi)除草劑，具有高效、廣譜、低毒及低用量等優(yōu)點(diǎn)，是目前廣泛用于稻田雜草防治的主要除草劑之一。芐嘧磺隆在使用的同時(shí)，其降解物是否對(duì)環(huán)境有不良影響已成為科學(xué)工作者日益關(guān)注的問(wèn)題。
　　 本研究以芐嘧磺隆為反應(yīng)原料水解制得芐嘧磺隆酸。產(chǎn)物經(jīng)熔點(diǎn)、元素分析、薄層色譜、紅外光譜(IR)和核磁共振1HNMR鑒定。芐嘧磺隆酸通過(guò)活性酯化法分別和牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)，制

2、得免疫原及包被原。對(duì)合成的抗原進(jìn)行紫外可見(jiàn)掃描，確證偶聯(lián)成功。
　　 以自制的芐嘧磺隆-BSA連接物為免疫原免疫新西蘭大耳白兔，從抗體的產(chǎn)生過(guò)程來(lái)看，兔二在第一次免疫后27天開(kāi)始有明顯的抗體產(chǎn)生，經(jīng)三次加強(qiáng)免疫后達(dá)到高峰，開(kāi)始有所下降，間接非競(jìng)爭(zhēng)ELISA測(cè)得其效價(jià)約為1:256000。本研究制得的芐嘧磺隆抗血清效價(jià)高，為建立酶聯(lián)免疫法測(cè)定環(huán)境中的芐嘧磺隆奠定了很好的基礎(chǔ)。
　　 本研究建立HPLC法同時(shí)測(cè)定芐嘧磺隆及其

3、水解產(chǎn)物芐嘧磺隆酸，考察了波長(zhǎng)、色譜柱、流動(dòng)相組成和流速對(duì)分離的影響，得到了最優(yōu)色譜條件：色譜柱：Kromasil-100-5 C18(4.6×250mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇：水(含2‰醋酸，調(diào)節(jié)pH至3.0)=70:30，流速：1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm，室溫條件下檢測(cè)。芐嘧磺隆和芐嘧磺隆酸的線性范圍為1.25～20.0mg·L-1，線性相關(guān)系數(shù)分別為0.9979和0.9980，檢測(cè)限分別為1.0×10-6和1.

4、0×10-6 mg·L-1。該法簡(jiǎn)便，在國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)過(guò)報(bào)道。
　　 培養(yǎng)出了芐嘧磺隆的單晶并用X射線衍射測(cè)定了該化合物的晶體結(jié)構(gòu)。該晶體屬于單斜晶系，C2/C空間群，晶胞參數(shù)為：a=33.831(7)A，b=6.9020(14)A，c=16.021(3)A，α=90.00(3)°，β=104.48(3)°，γ=90.00(3)°，V=3622.1(13)A3，Z=2，F(xiàn)(000)＝1712，最終偏差因子R1=0.0559，wR1=