人CystatinC基因克隆、表達研究及其單克隆抗體和多克隆抗體的制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：構(gòu)建重組質(zhì)粒并原核表達人Cystatin C，制備其鼠源性單克隆抗體和兔源性多克隆抗體并鑒定其生物學(xué)活性，分析Cystatin C 在食管癌和胃癌組織的表達分布情況。
　　 方法:從人的胃癌細胞AGS 上克隆擴增Cystatin C基因，構(gòu)建pET44-Cystatin C 重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化于大腸桿菌表達菌株BL21（DE3）獲得重組人Cystatin C 蛋白。以復(fù)性后的純化CystatinC 包涵體蛋白免疫BALB/c

2、小鼠和新西蘭兔，從而制備鼠抗人Cystatin C 單克隆抗體和兔抗人Cystatin C 多克隆抗體。經(jīng)Western Blot和ELISA 方法鑒定單克隆抗體及多克隆抗體的特異性。應(yīng)用免疫組化技術(shù)和RT-PCR 等方法檢測人Cystatin C 在胃癌食管癌組織表達情況。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建了人Cystatin C 重組質(zhì)粒并獲得其純化原核表達蛋白。免疫印跡實驗和ELISA 實驗提示所制備單克隆抗體和多克隆抗體對天然人Cy

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