芐嘧磺隆單克隆抗體的制備及應用初探.pdf

1、隨著科技水平的日益提高，使用農藥已成為保障農業(yè)生產不可缺少的環(huán)節(jié)。農藥通過對有害生物的防治和提高農副產品的產量、質量來改善人們的生活。目前，我國已經成為世界上第二大農藥使用國，年消耗量估計在30萬噸以上。近年來，由于有害生物抗藥性的增強，使用農藥的濃度和次數(shù)不斷增加，導致有害物質大量殘留在環(huán)境中，并通過食物鏈擴大污染，影響環(huán)境生態(tài)平衡。農藥在人體內的積累和富集，能夠引發(fā)各種疾病，直接影響到人類的健康。由農藥殘留引發(fā)的問題已經引起人們的高

2、度重視。因此，建立一套簡便、快速、靈敏的檢測方法勢在必行。
　　 目前，芐嘧磺隆(BSM)是農民使用最多的一種稻田除草劑。但是，長期大量地使用勢必會導致該除草劑在環(huán)境中產生殘留，危害整個生態(tài)系統(tǒng)的安全。因此對該除草劑進行實時監(jiān)測是很有必要的。
　　 目前，檢測芐嘧磺隆殘留量的方法為傳統(tǒng)的色譜法。雖然，色譜法較靈敏、準確，但是這種方法耗時長、檢測程序繁瑣、費用較高。而免疫學方法中的ELISA技術(酶聯(lián)免疫吸附測定技術)卻彌

3、補了色譜法的缺點，它不但簡便、快速、靈敏，而且可以大批量地檢測樣本。因此，該技術越來越多地被用于檢測環(huán)境中的農藥殘留量。
　　 在本研究中，選擇戊二醛作為偶聯(lián)劑制備了芐嘧磺隆人工交聯(lián)抗原BSM—OVA，經不同的方法鑒定抗原制備成功后，免疫BALB/c小鼠。第五次免疫后7天，測定小鼠的血清效價達到了1：1．28×105，IC50值為0．032μg·mL—1。采用PEG介導法將免疫后小鼠的脾臟細胞與SP2/0骨髓瘤細胞進行融合。經過

4、篩選，得到一株芐嘧磺隆單克隆抗體陽性雜交瘤細胞株，編號為2H1，分泌的抗體類型為IgG2b。采用體內誘生腹水法和辛酸—飽和硫酸銨法大量制備并純化了芐嘧磺隆單克隆抗體。采用間接競爭ELISA方法測定了抗體的最佳工作條件，建立了利用單克隆抗體檢測芐嘧磺隆殘留量的間接競爭ELISA方法，制作了檢測該除草劑的間接競爭ELISA標準曲線，得到回歸方程y=13．816x+34．753，檢測范圍為1～1883ng·mL—1，最低檢測限0．2ng·mL

5、—1。芐嘧磺隆以濃度10—1～103ng·mL—1在東湖水樣中添加，測得回收率為96．53％～107．2％，變異系數(shù)(CV)為3．711％～8．637％，數(shù)據(jù)表明該方法具有較高的精確度和靈敏度。利用該方法檢測了某些糧谷類農作物樣本中芐嘧磺隆的農藥殘留量，發(fā)現(xiàn)了部分樣本中存在該除草劑的殘留。
　　 本研究探索了一條利用免疫學方法檢測芐嘧磺隆殘留量的新途徑，且與傳統(tǒng)方法相比最大的特點快速、靈敏、可批量檢測樣本，在環(huán)境實時監(jiān)測方面具有