菝葜中醛糖還原酶抑制成分的篩選、分離及體內(nèi)活性研究.pdf

1、菝葜是一種被廣泛應用的傳統(tǒng)中藥，它能顯著降低實驗性糖尿病小鼠的血糖，但對菝葜降血糖有效成分及其體內(nèi)外酶學性質(zhì)研究尚未有人報道。本課題通過建立的中藥雙酶篩選模型，首次發(fā)現(xiàn)中藥菝葜對醛糖還原酶和α-葡萄糖苷酶都具有強抑制作用，顯示了其作為具有降血糖作用的糖尿病并發(fā)癥藥物的潛在開發(fā)前景。 本文以醛糖還原酶和α-葡萄糖苷酶雙酶抑制活性為導向從中藥菝葜中分離和純化了具有顯著抑制活性的兩種物質(zhì)——A和B。研究了這兩個物質(zhì)的酶學性質(zhì)、體內(nèi)降血

2、糖活性及對肝糖原含量和體內(nèi)酶活的影響。 主要分離工藝路線為：乙醇浸提得浸膏、再依次用石油醚和乙酸乙酯萃取，其中乙酸乙酯相經(jīng)過硅膠柱層析進一步純化得到A、B兩種活性組分，得率分別為0.124％和0.096％。經(jīng)化學方法定性分析，初步定性為皂甙類(A)和黃酮類 (B)，HPLC檢測顯示A純度為80％，B達到99.5％以上。酶促反應動力學實驗表明：物質(zhì)A對醛糖還原酶為非競爭性抑制，比活力為44.2U/mg，物質(zhì)B對醛糖還原酶為

3、競爭性抑制，比活力為225U/mg。物質(zhì)A對α-葡萄糖苷酶比活力為32.5U/mg，抑制活性較弱，物質(zhì)B對α-葡萄糖苷酶為非競爭性抑制，比活力為195.2U/mg，物質(zhì)B對α-葡萄糖苷酶的抑制活性是拜糖蘋的3倍。 動物實驗表明，每天按120mg/kg給藥，連續(xù)給藥八天，物質(zhì)A對正常小鼠和四氧嘧啶糖尿病小鼠都有明顯的降血糖作用，同樣實驗顯示物質(zhì)B也有類似的降血糖效果，但A的降糖效果好與B，接近市售格華止和拜糖蘋。物質(zhì)A和物質(zhì)B都能