DADS抑制SW480細胞系生長增殖的相關(guān)蛋白質(zhì)分子鑒定.pdf

1、目的:
　　本室前期應(yīng)用比較蛋白質(zhì)組學,從DADS處理的SW480細胞系中,篩出了一些具有潛在應(yīng)用價值的差異蛋白質(zhì)分子。本實驗就部分差異表達蛋白質(zhì)進行進一步分析與鑒定,因此,我們選擇泛肽、CK19和FKBP蛋白質(zhì)進行驗證,為下一步的實驗研究奠定堅實的基礎(chǔ)。
　　方法:
　　采用MTT實驗、細胞計數(shù)法,觀察不同濃度和作用時間DADS對SW480細胞的生長抑制作用;施用流式細胞儀,分析50μg/ml DADS對SW480細

2、胞的周期分布及凋亡率的影響;運用RT-PCR方法,檢測CK19 mRNA表達水平;用免疫印跡方法,分析50μg/ml DADS處理SW480細胞系后泛肽、CK19和FKBP的表達水平。
　　結(jié)果:
　　MTT比色法檢測顯示,DADS能明顯抑制SW480細胞系生長增殖,呈濃度和時間依賴性,SW480細胞系經(jīng)25μg/ml,35μg/ml,50μg/ml和70μg/ml DADS處理48h,其細胞生長增殖抑制率分別為18.67％

3、、33.02%、49.12%和66.86%,細胞生長增殖速度明顯較對照組慢,差異有顯著性意義(P<0.05)。細胞計數(shù)結(jié)果表明, SW480細胞群體倍增時間為30.81h,而當DADS的濃度由25μg/ml增加到70μg/ml時,其細胞群體倍增時間由34.68h延長至96.33h,與對照組比較,差異有顯著性意義(P<0.05)。流式細胞儀分析結(jié)果顯示,50μg/ml DADS將SW480細胞阻滯在G2/M期,并使細胞凋亡率增加。應(yīng)用半定

4、量RT-PCR檢測CK19的基因mRNA表達水平,結(jié)果證實,50μg/ml DADS處理SW480細胞后,CK19 mRNA表達較對照組降低,差異有顯著性意義(P<0.05);Western blotting分析結(jié)果顯示,50μg/ml DADS處理SW480細胞48h,泛肽表達較對照組增強,而CK19和FKBP的表達明顯降低,差異均為2倍以上。
　　結(jié)論:
　　1.DADS能抑制SW480細胞系的生長增殖,且呈劑量依賴效應(yīng)