DADS抑制SW480細(xì)胞系生長(zhǎng)增殖的相關(guān)蛋白質(zhì)分子鑒定.pdf

1、目的:
　　本室前期應(yīng)用比較蛋白質(zhì)組學(xué),從DADS處理的SW480細(xì)胞系中,篩出了一些具有潛在應(yīng)用價(jià)值的差異蛋白質(zhì)分子。本實(shí)驗(yàn)就部分差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步分析與鑒定,因此,我們選擇泛肽、CK19和FKBP蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證,為下一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　方法:
　　采用MTT實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞計(jì)數(shù)法,觀察不同濃度和作用時(shí)間DADS對(duì)SW480細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用;施用流式細(xì)胞儀,分析50μg/ml DADS對(duì)SW480細(xì)

2、胞的周期分布及凋亡率的影響;運(yùn)用RT-PCR方法,檢測(cè)CK19 mRNA表達(dá)水平;用免疫印跡方法,分析50μg/ml DADS處理SW480細(xì)胞系后泛肽、CK19和FKBP的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　MTT比色法檢測(cè)顯示,DADS能明顯抑制SW480細(xì)胞系生長(zhǎng)增殖,呈濃度和時(shí)間依賴性,SW480細(xì)胞系經(jīng)25μg/ml,35μg/ml,50μg/ml和70μg/ml DADS處理48h,其細(xì)胞生長(zhǎng)增殖抑制率分別為18.67％

3、、33.02%、49.12%和66.86%,細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度明顯較對(duì)照組慢,差異有顯著性意義(P<0.05)。細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果表明, SW480細(xì)胞群體倍增時(shí)間為30.81h,而當(dāng)DADS的濃度由25μg/ml增加到70μg/ml時(shí),其細(xì)胞群體倍增時(shí)間由34.68h延長(zhǎng)至96.33h,與對(duì)照組比較,差異有顯著性意義(P<0.05)。流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示,50μg/ml DADS將SW480細(xì)胞阻滯在G2/M期,并使細(xì)胞凋亡率增加。應(yīng)用半定

4、量RT-PCR檢測(cè)CK19的基因mRNA表達(dá)水平,結(jié)果證實(shí),50μg/ml DADS處理SW480細(xì)胞后,CK19 mRNA表達(dá)較對(duì)照組降低,差異有顯著性意義(P<0.05);Western blotting分析結(jié)果顯示,50μg/ml DADS處理SW480細(xì)胞48h,泛肽表達(dá)較對(duì)照組增強(qiáng),而CK19和FKBP的表達(dá)明顯降低,差異均為2倍以上。
　　結(jié)論:
　　1.DADS能抑制SW480細(xì)胞系的生長(zhǎng)增殖,且呈劑量依賴效應(yīng)