用于肝組織工程三維多孔活性支架的構(gòu)建研究.pdf

1、目前，肝移植手術(shù)依然是根治末期肝衰竭的唯一手段。但是供體器官的短缺，高昂的手術(shù)費用以及術(shù)后需要長期服用免疫抑制藥物這三方面原因限制了肝移植的發(fā)展。以細(xì)胞治療為基礎(chǔ)的肝臟治療方案——肝組織工程，以替代肝移植手術(shù)為目標(biāo)展開研究，希望在未來可以構(gòu)建人工肝組織，替代部分肝功能。
　　 隨著肝組織工程的發(fā)展，人們對細(xì)胞培養(yǎng)支架的要求不再局限于生物相容性，而是要求支架具有生物活性，能夠最佳的模擬體內(nèi)環(huán)境，包括各種信號分子，細(xì)胞外基質(zhì)，能夠促

2、進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，從而引導(dǎo)組織再生。
　　 本文旨在構(gòu)建肝細(xì)胞特異性的三維仿生活性支架，用于肝細(xì)胞培養(yǎng)，模擬體內(nèi)肝細(xì)胞的生長環(huán)境，優(yōu)化體外肝細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)，提高肝細(xì)胞代謝功能，優(yōu)化生物人工肝支持系統(tǒng)。
　　 以殼聚糖，透明質(zhì)酸為原料，以肝實質(zhì)細(xì)胞表面脫唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)的配體一半乳糖基團(tuán)以共價鍵合修飾透明質(zhì)酸，合成半乳糖化透明質(zhì)酸，再通過冷凍干燥法制備了殼聚糖-半乳糖化透明質(zhì)酸三維多孔支架。通過紅外，元素分析，

3、及X射線光電子能譜表征半乳糖基團(tuán)對透明質(zhì)酸的修飾，并考察了支架的形態(tài)，親水性和力學(xué)性能。通過細(xì)胞在材料表面的黏附，支架中的細(xì)胞形態(tài)及特異性肝功能的表達(dá)表征支架對于細(xì)胞的相容性。實驗結(jié)果表明支架中半乳糖化透明質(zhì)酸的添加改善了支架的親水性，增加了三維支架的柔韌性，半乳糖基團(tuán)的引入為肝細(xì)胞提供了貼附位點，提高了肝細(xì)胞的貼附率，有利于體外培養(yǎng)肝細(xì)胞類肝組織結(jié)構(gòu)的形成和分化功能的表達(dá)。
　　 以殼聚糖-半乳糖化透明質(zhì)酸支架為基礎(chǔ)，通過物理

4、吸附和化學(xué)交聯(lián)方法結(jié)合肝素制備殼聚糖-半乳糖化透明質(zhì)酸-肝素復(fù)合支架，并通過紅外，掃描電鏡，XPS等手段對復(fù)合支架進(jìn)行表征。通過甲苯胺藍(lán)方法檢測肝素，確定肝素在支架上的結(jié)合及釋放情況。復(fù)合支架進(jìn)一步結(jié)合表皮細(xì)胞生長因子EGF，用ELISA方法檢測EGF的控釋，構(gòu)建了以生長因子修飾的可以實現(xiàn)控制釋放的復(fù)合活性支架。
　　 針對生長因子活性不易保持，容易變性，價格昂貴等缺點，我們進(jìn)行了將表達(dá)生長因子的基因質(zhì)粒及其載體與組織工程支架相