TopBP1和ATR在乳腺癌組織中的表達及臨床意義.pdf

1、[研究目的]
　　 基因組完整性對于生物體的生存是至關(guān)重要的，DNA損傷應(yīng)答通過逆轉(zhuǎn)外源性和內(nèi)源性DNA損傷促進分裂細胞忠實傳遞基因組，并且對于復(fù)制期間細胞生存也是必要的。由于染色體不穩(wěn)定和腫瘤之間存在密切聯(lián)系，推測DNA損傷應(yīng)答系統(tǒng)缺陷可能對乳腺癌發(fā)生發(fā)展起主要的促進作用。DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱβ結(jié)合蛋白1(TopBP1)、共濟失調(diào)毛細血管擴張突變和Rad3相關(guān)蛋白（ATR）是DNA損傷應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)的兩個重要成員，而且TopBP1對于

2、ATR的充分激活是必需的。既往研究顯示TopBP1和ATR的突變或多態(tài)性與人類腫瘤發(fā)病風(fēng)險相關(guān)，本研究通過構(gòu)建組織芯片利用免疫組化方法檢測這兩個蛋白在乳腺癌，特別是三陰性乳腺癌中的表達，并分析與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，旨在闡明TopBP1和ATR是否在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，并為三陰性乳腺癌臨床治療策略的選擇提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 [研究方法]
　　 第一部分:從上海長海醫(yī)院和黃浦區(qū)中心醫(yī)院收集272例乳腺癌組織

3、和118例癌旁組織構(gòu)建組織芯片，使用免疫組化Enyision法檢測TopBP1和ATR的表達情況，兔抗人多克隆抗體購自英國Abcam公司。每個病例根據(jù)染色強度計分和陽性細胞百分比計分的乘積綜合評定為染色陰性或陽性。相關(guān)臨床病理信息如患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理類型、組織學(xué)分級、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及ER、PR、HER2、p53狀態(tài)等都收集起來以進行相關(guān)性分析。數(shù)據(jù)統(tǒng)計使用SPSS19.0軟件進行。分析癌組織和癌旁組織間蛋白表達

4、率的差異以及蛋白表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系使用Pearson卡方檢驗，分析TopBP1和ATR表達水平間的相關(guān)性使用Spearman秩相關(guān)，影響蛋白表達的多因素分析采用logistic回歸。所有統(tǒng)計檢驗均為雙側(cè)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 第二部分:從上海新華醫(yī)院收集78例三陰性乳腺癌組織和53例配對的癌旁組織制成組織芯片，同樣使用免疫組化方法檢測TopBP1和ATR的表達情況。所有78名患者加上第一部分研究中的

5、46名三陰性乳腺癌患者均進行生存隨訪。使用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計操作。分析配對的三陰性乳腺癌與癌旁組織間蛋白表達率的差異使用McNemar檢驗，蛋白不同表達水平間患者的總生存期(OS)使用Kaplan-Meier法估計并進行l(wèi)og-rank檢驗，影響生存的獨立預(yù)后因素使用Cox回歸模型進行評估。
　　 [研究結(jié)果]
　　 第一部分:236例浸潤性乳腺癌組織和113例癌旁組織同時獲得TopBP1和ATR的實驗結(jié)果。免

6、疫組化染色顯示TopBP1在正常乳腺上皮幾乎完全表達在細胞核，而在乳腺癌組織中為胞核胞漿同時染色的異常表達。ATR在癌組織和癌旁組織均為胞核染色。與癌旁組織相比較，TopBP1和ATR在乳腺癌組織中的表達率顯著性增高(P＜0.001)。TopBP1表達在PR陽性和p53陰性乳腺癌中顯著增高，而ATR表達在腫瘤大小為T1、分期Ⅰ期、HER2陰性和三陰性乳腺癌亞組中顯著降低(P＜0.05)。TopBP1和ATR的表達水平間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。多因

7、素logistic回歸顯示TopBP1表達與PR顯著性相關(guān)，ATR表達與腫瘤大小顯著性相關(guān)。
　　 第二部分:74例三陰性乳腺癌組織和53例配對的癌旁組織同時獲得了TopBP1和ATR的免疫組化染色結(jié)果。加上來自第一部分的46例，總共有120例三陰性乳腺癌進入統(tǒng)計分析。與配對的癌旁組織相比，TopBP1在三陰性乳腺癌組織中的表達率顯著性增高（P＜0.001），而ATR在兩者間的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。TopBP1低表達與淋巴結(jié)陽性

8、顯著相關(guān)（P＜0.01），而ATR表達水平與三陰性乳腺癌臨床病理參數(shù)間均未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性，TopBP1和ATR的表達水平之間也未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。三陰性乳腺癌患者按照不同的TopBP1、ATR和TopBP1/ATR表達水平分組的生存差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，Cox回歸模型顯示TNM分期是影響三陰性乳腺癌患者總生存的獨立預(yù)后因素。
　　 [研究結(jié)論]
　　 在乳腺癌組織中TopBP1和ATR的表達水平顯著性增高但二者之間未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性。To

9、pBP1在乳腺癌細胞中出現(xiàn)胞核胞漿異位表達現(xiàn)象，且表達水平在乳腺癌中與PR和p53顯著性相關(guān)，在三陰性乳腺癌亞組中與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著性相關(guān)，這些都提示TopBP1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。ATR的表達水平在乳腺癌中與腫瘤大小、TNM分期、HER2狀態(tài)、三陰性表型相關(guān)，與其發(fā)揮DNA損傷應(yīng)答功能相一致，而與三陰性乳腺癌各臨床病理參數(shù)間均未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性，其在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用尚需進一步研究。Cox回歸模型提示TNM分期是影響三陰性