子癇前期滋養(yǎng)細(xì)胞引起腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能損傷的機(jī)制研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分、重度子癇前期腎小球?yàn)V過(guò)屏障損傷的臨床研究
　　 目的：探討重度子癇前期腎小球?yàn)V過(guò)屏障損傷的相關(guān)情況及對(duì)妊娠結(jié)局的影響。
　　 方法：回顧性分析112例重度子癇前期患者的臨床資料，了解重度子癇前期血清肌酐水平及尿蛋白丟失的程度。按尿蛋白丟失的程度分為隨機(jī)尿蛋白（-）～(++)組（A組）30例，隨機(jī)尿蛋白(+++)～(++++)組（B組）82例，對(duì)兩組的血清肌酐水平、母體妊娠結(jié)局及

2、圍生兒結(jié)局進(jìn)行比較。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，當(dāng)卡方檢驗(yàn)中理論頻數(shù)<1時(shí)，采用Fisher精確概率法檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：在重度子癇前期患者中，血清肌酐升高者占總例數(shù)的30.4％，隨機(jī)尿蛋白(+++)～(++++)者占總例數(shù)的73.2％，隨著尿蛋白丟失的加重，血清肌酐含量顯著升高(P<0.05)，母體不良結(jié)局的總例數(shù)顯著增加(P<0.05)，胎兒窘迫的發(fā)生率顯著升高(P<0.

3、05)。
　　 結(jié)論：重度子癇前期腎小球?yàn)V過(guò)屏障損傷及濾過(guò)功能減退均較常見，該損傷可能最終導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局。
　　 第二部分、滋養(yǎng)細(xì)胞通過(guò)產(chǎn)生sFlt-1引起腎小球內(nèi)庋細(xì)胞屏障功能損傷的研究
　　 目的：
　　 1．研究滋養(yǎng)細(xì)胞大量表達(dá)sFlt-1對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能的影響，探討子癇前期VEGF與sFlt-1失衡對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能的影響。
　　 2．研究VEGF對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞過(guò)表達(dá)sFlt-

4、1引起的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能損傷的影響，探討VEGF在維護(hù)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能中發(fā)揮的作用。
　　 方法：
　　 1．脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將sFlt-1表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到滋養(yǎng)細(xì)胞中，采用RT-PCR及real-time PCR方法檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞中sFlt-1 mRNA的表達(dá)，并用ELISA方法檢測(cè)滋養(yǎng)細(xì)胞中sFlt-1蛋白的表達(dá)，以確定轉(zhuǎn)染效果。
　　 2．利用Transwell共培養(yǎng)模型將過(guò)量表達(dá)sFlt-1的滋養(yǎng)細(xì)胞與

5、腎小球內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，采用熒光標(biāo)記的牛血清白蛋白檢測(cè)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的單層屏障功能。
　　 3．利用VEGF干預(yù)過(guò)量表達(dá)sFlt-1的滋養(yǎng)細(xì)胞和腎小球內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)組，采用熒光標(biāo)記的牛血清白蛋白檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的單層屏障功能。
　　 結(jié)果：
　　 1．滋養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染sFlt-1表達(dá)質(zhì)粒后，滋養(yǎng)細(xì)胞中sFlt-1 mRNA及蛋白的表達(dá)顯著升高。
　　 2．當(dāng)過(guò)量表達(dá)sFlt-1的滋養(yǎng)細(xì)胞與腎小球內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，腎

6、小球內(nèi)皮細(xì)胞單層屏障功能明顯受損。
　　 3.VEGF可顯著改善過(guò)量表達(dá)sFlt-1的滋養(yǎng)細(xì)胞與腎小球內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)引起的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞單層屏障功能損傷。
　　 結(jié)論：滋養(yǎng)細(xì)胞中VEGF與sFlt-1失衡可引起腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能損傷，這可能是子癇前期腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能損傷的重要原因，VEGF在緩解由sFlt-1表達(dá)增加引起的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能損傷方面起著至關(guān)重要的作用。
　　 第三部分、凋亡/壞死滋養(yǎng)

7、細(xì)胞導(dǎo)致腎小球內(nèi)庋細(xì)胞屏障功能損傷的研究
　　 目的：
　　 1．研究凋亡、壞死滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能的影響，探討子癇前期腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能損傷的機(jī)制。
　　 2．研究VEGF對(duì)凋亡、壞死滋養(yǎng)細(xì)胞引起的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能損傷的影響，探討VEGF在腎小球內(nèi)皮細(xì)胞屏障功能損傷機(jī)制中的作用。
　　 方法：
　　 1．利用紫外線照射誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡，利用水浴加溫誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞壞死。采用流式

8、細(xì)胞術(shù)及熒光染料染色等方法分析滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡與壞死。
　　 2．將正常、凋亡及壞死的滋養(yǎng)細(xì)胞和腎小球內(nèi)皮細(xì)胞于Transwell系統(tǒng)上室中混合培養(yǎng)，采用熒光標(biāo)記的牛血清白蛋白檢測(cè)腎小球內(nèi)皮細(xì)胞的單層屏障功能。
　　 3．利用VEGF干預(yù)凋亡、壞死的滋養(yǎng)細(xì)胞和腎小球內(nèi)皮細(xì)胞混合培養(yǎng)組，采用熒光標(biāo)記的牛血清白蛋白檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞的單層屏障功能。
　　 4．分別用細(xì)胞示蹤劑將滋養(yǎng)細(xì)胞與腎小球內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記為不同顏色，將已標(biāo)記

9、的凋亡的滋養(yǎng)細(xì)胞與已標(biāo)記的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞混合培養(yǎng)24小時(shí)，熒光顯微鏡下觀察兩種細(xì)胞的形態(tài)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1．紫外線照射使滋養(yǎng)細(xì)胞的凋亡率達(dá)到80％以上，水浴加熱使滋養(yǎng)細(xì)胞的壞死率達(dá)到80％以上。
　　 2．當(dāng)正常、凋亡及壞死的滋養(yǎng)細(xì)胞與腎小球內(nèi)皮細(xì)胞混合培養(yǎng)時(shí)，腎小球內(nèi)皮細(xì)胞單層屏障功能明顯受損。
　　 3.VEGF可顯著改善凋亡、壞死的滋養(yǎng)細(xì)胞與腎小球內(nèi)皮細(xì)胞混合培養(yǎng)引起的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞單層