仔豬小腸5-HT和5-HT2BR的分布及5-HT對(duì)體外培養(yǎng)腸黏膜MVECs的作用.pdf

1、本研究選取初生未哺乳的0日齡仔豬、哺乳前期的5日齡仔豬、哺乳中期的15日齡仔豬和生長(zhǎng)期的100日齡豬為研究對(duì)象，采用免疫組織化學(xué)、血液生化分析等方法探討小腸5-HT和5-HT2BR的分布規(guī)律以及5-HT在外周血中的合成和代謝規(guī)律。此外，本研究還以體外培養(yǎng)的大鼠腸黏膜MVECs為模型對(duì)5-HT2BR在腸道微循環(huán)的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行了初步研究。主要研究結(jié)果如下： 1.豬小腸5-HT和5-HT2BR的分布豬小腸5-HT在0、5、15和100

2、日齡的十二指腸、空腸和回腸中均有分布。5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞分布于小腸黏膜中下部的絨毛和腸腺中。5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞多呈錐體形，免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀，位于胞質(zhì)中，胞核陰性。 豬小腸5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度、絨毛和腸腺5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均受日齡和腸段共同影響。由0日齡至100日齡豬小腸5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度呈先升高后遞減的趨勢(shì)，絨毛5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量呈遞減趨勢(shì)，腸腺5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性

3、細(xì)胞數(shù)量呈增加趨勢(shì)；小腸各段5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度呈現(xiàn)由前到后顯著遞減的趨勢(shì)，絨毛5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)由前到后先遞增后遞減的趨勢(shì)，腸腺5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量呈現(xiàn)由前到后先遞減后遞增的趨勢(shì)。 0日齡和5日齡仔豬小腸沒(méi)有5-HT2BR分布，15日齡仔豬僅有4頭在十二指腸中分布有5-HT2BR，100日齡時(shí)，5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞廣泛分布于十二指腸、空腸和回腸。5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞多分布于小腸

4、黏膜固有層結(jié)締組織中，且位于腸腺周?chē)?-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞體積較小，多呈圓形、卵圓形，免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀，位于胞質(zhì)中，胞核陰性。5-HT2BR也分布于部分肌間神經(jīng)元的胞體中。 在有5-HT2BR表達(dá)的腸段中，100日齡十二指腸黏膜5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞的密度顯著高于15日齡十二指腸(P<0.05)；100日齡十二指腸黏膜5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度顯著高于其他兩個(gè)腸段(P<0.05)，且回腸黏

5、膜5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度顯著高于空腸(P<0.05)。 2.大鼠小腸5．HT和5．HT2BR的分布大鼠5-HT在十二指腸、空腸和回腸中均有分布。5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞分布于小腸黏膜中下部的絨毛和腸腺中。5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞多呈錐體形，免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀，位于胞質(zhì)中，胞核陰性。 大鼠小腸5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度除空腸具有性別差異(P<0.05)之外，其余均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。絨毛

6、5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量十二指腸顯著高于空腸和回腸(P<0.05)，空腸和回腸之間無(wú)明顯差異(P>0.05)。腸腺5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量空腸顯著高于十二指腸和回腸(P<0.05)，且十二指腸腸腺5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著高于回腸(P<0.05)。大鼠小腸5-HT2BR廣泛分布于十二指腸、空腸和回腸。5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞多分布于小腸絨毛中軸的固有層結(jié)締組織中，5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞體積較小，多呈圓形、卵圓

7、形，免疫反應(yīng)陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒狀，位于胞質(zhì)中，胞核陰性。5-HT2BR也分布于部分肌間神經(jīng)元的胞體中。 大鼠小腸黏膜5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度受性別和腸段的共同影響。雌性大鼠小腸黏膜5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度顯著高于雄性(P>0.05)。小腸黏膜5-HT2BR免疫反應(yīng)陽(yáng)性細(xì)胞密度由前到后呈遞減趨勢(shì)。 3.外周血中5-HT的合成與代謝由0日齡至15日齡，仔豬外周血中L-Trp的含量顯著增加(P<0.05)

8、，5-HT的含量在0日齡時(shí)顯著高于5日齡和15日齡(P<0.05)。0日齡時(shí)，L-Trp-5HT通路轉(zhuǎn)化率明顯高于5日齡和15日齡(P<0.05)。5-HIAA在各日齡仔豬外周血中沒(méi)有檢出。 成年SD大鼠外周血中的L-Trp、5-HT以及轉(zhuǎn)化率均無(wú)性別差異。血液中5-HT的平均含量10.82μmol/L(即2.30μg/mL)即作為體外細(xì)胞試驗(yàn)的參考條件。5-HIAA在大鼠外周血中沒(méi)有檢出。 4.5-HT對(duì)大鼠腸黏膜MV

9、ECs的作用機(jī)理大鼠腸黏膜MVECs無(wú)內(nèi)源性5-HT，在細(xì)胞膜上有5-HT2BR分布。 在大鼠腸黏膜MVECs培養(yǎng)液中加入2.30μg/mL的5-HT培養(yǎng)6小時(shí)之后可以顯著降低FN的分泌量(P<0.05)，而培養(yǎng)12小時(shí)之后0.23μg/mL和23.0μg/mL的5-HT均可以顯著降低FN的分泌量(P<0.05)。5-HT2BR激動(dòng)劑BW-723C86和拮抗劑SB200646均可降低大鼠腸黏膜MVECs FN的分泌量(P<0.0