5-HT1A受體和5-HT重?cái)z取雙重調(diào)節(jié)活性化合物的篩選與行為學(xué)評(píng)價(jià).pdf

1、目的:
　　對(duì)本研究所合成的13種新型化合物,通過放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn),篩選出對(duì)5-羥色胺1A受體(5-HT1AR)和5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(SERT)都具有高結(jié)合活性的化合物;并對(duì)優(yōu)選的雙重高親合活性化合物,在多種動(dòng)物模型上評(píng)價(jià)其抗抑郁作用;同時(shí)還在多種學(xué)習(xí)記憶動(dòng)物模型上評(píng)價(jià)其改善認(rèn)知的效能;這些為進(jìn)一步深入研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.通過質(zhì)粒擴(kuò)增、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法培養(yǎng)瞬時(shí)表達(dá)SERT的HEK-293細(xì)胞,并常

2、規(guī)培養(yǎng)穩(wěn)定表達(dá)5-HT1A受體的PC-12細(xì)胞,建立制備大量相關(guān)蛋白的穩(wěn)定方法;
　　2.應(yīng)用放射配基受體結(jié)合實(shí)驗(yàn),在本所合成的系列新型化合物中,篩選對(duì)SERT和5-HT1A受體都具有高親合力的小分子化合物;對(duì)優(yōu)選化合物YL-0919配體結(jié)合特征進(jìn)一步評(píng)價(jià);繼而利用海馬突觸體5-HT重吸收功能抑制實(shí)驗(yàn),檢測(cè)其對(duì)5-HT重吸收功能的抑制作用,離體水平驗(yàn)證其生物活性。
　　3.采用多種抑郁動(dòng)物模型(小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)、小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

3、、大鼠獲得性無助實(shí)驗(yàn)和大鼠嗅球切除實(shí)驗(yàn))對(duì)優(yōu)選化合物YL-0919進(jìn)行抗抑郁作用的評(píng)價(jià)。
　　4.采用多種學(xué)習(xí)記憶動(dòng)物模型(小鼠物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)、小鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和小鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn))對(duì)優(yōu)選化合物YL-0919進(jìn)行改善認(rèn)知活性的評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果:
　　1.建立了SERT和5-HT1A受體蛋白制備和離體水平活性化合物篩選的方法,技術(shù)穩(wěn)定可靠。
　　2.放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)篩選表明,在13種待測(cè)化合物中,YL-09

4、19具有較強(qiáng)的雙重結(jié)合活性,與SERT結(jié)合的Ki值為5.38±0.27nM,與5-HT1A受體結(jié)合的Ki值為0.44±0.32nM。同時(shí)突觸體重吸收功能抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,YL-0919對(duì)大鼠海馬粗制突觸體的5-HT重?cái)z取功能具有顯著抑制作用,IC50值為8.51±0.23nM。以上離體實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)YL-0919對(duì)這兩種受體都具有高親和活性。
　　3.①單次灌胃給予YL-0919(0.625-2.5mg/kg),可以顯著縮短小鼠懸尾

5、不動(dòng)時(shí)間(P<0.05或P<0.01);②單次灌胃給予YL-0919(0.625mg/kg,1.25mg/kg),均可以顯著縮短小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間(均為P<0.01);③連續(xù)灌胃給予YL-0919(0.625mg/kg/天,1.25mg/kg/天),均可以使獲得性無助大鼠的逃避失敗次數(shù)顯著減少(分別為P<0.05或P<0.001);④連續(xù)灌胃給予YL-0919(2.5mg/kg/天)也可以顯著逆轉(zhuǎn)大鼠嗅球切除導(dǎo)致的開場(chǎng)運(yùn)動(dòng)次數(shù)的增加(

6、P<0.01);⑤連續(xù)灌胃給予YL-0919(1.25mg/kg/天,2.5mg/kg/天)也可以顯著逆轉(zhuǎn)大鼠嗅球切除誘導(dǎo)的逃避反應(yīng)次數(shù)的增加(P<0.01);⑥以上行為效應(yīng)與經(jīng)典抗抑郁藥物丙咪嗪或氟西汀一致。并且在上述劑量范圍內(nèi),YL-0919不影響小鼠的自發(fā)活動(dòng),提示YL-0919具有抗抑郁活性。
　　4.①連續(xù)灌胃給予YL-0919(0.625mg/kg/天,2.5mg/kg/天)可以顯著升高小鼠物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜕系淖R(shí)別指數(shù)

7、(P<0.05或P<0.01);②在Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上,連續(xù)灌胃給予YL-0919(2.5mg/kg/天,5mg/kg/天),可以顯著增加小鼠在目標(biāo)象限停留時(shí)間和目標(biāo)象限穿越次數(shù)(均為P<0.05);③在跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型上,連續(xù)灌胃給予YL-0919(1.25mg/kg/天,2.5mg/kg/天)可以使記憶障礙小鼠的跳臺(tái)潛伏期顯著延長(zhǎng)(P<0.01),并使錯(cuò)誤跳臺(tái)次數(shù)顯著減少(P<0.01);④以上行為效應(yīng)均與經(jīng)典改善認(rèn)知

8、藥物多奈哌齊
　　一致,提示YL-0919具有促進(jìn)認(rèn)知的活性。
　　結(jié)論:
　　1.經(jīng)過放射性配體受體結(jié)合實(shí)驗(yàn)篩選,發(fā)現(xiàn)YL-0919與SERT和5-HT1A受體蛋白均具有較高的結(jié)合活性,并且具有較強(qiáng)的5-HT重?cái)z取的抑制功能,可能是具有SERT和5-HT1A受體雙重調(diào)節(jié)作用的優(yōu)選化合物;
　　2.灌胃給予YL-0919(0.625-1.25mg/kg)在多種抑郁動(dòng)物模型上表現(xiàn)出顯著抗抑郁的作用;
　　3.