小鼠早期胚胎內(nèi)部活性氧水平與胚胎凋亡通路關(guān)系的研究.pdf

1、哺乳動物的胚胎在體外早期發(fā)育過程中會發(fā)生發(fā)育阻滯、降低胚胎發(fā)育率并影響胚胎質(zhì)量，最終導(dǎo)致細胞凋亡，而活性氧類物質(zhì)（如H2O2）是造成這種現(xiàn)象的原因之一。目前被人們熟知的主要細胞凋亡通路是死亡受體通路、線粒體通路及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路，但Caspase-12是否參與活性氧引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激所誘導(dǎo)胚胎凋亡過程仍不是很清楚，另一方面活性氧誘導(dǎo)小鼠早期胚胎發(fā)育凋亡過程中起主要作用的凋亡通路不明。因此本試驗的目的是證實活性氧誘導(dǎo)通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路的胚胎凋亡是否有

2、Caspase-12參與，并探討不同活性氧水平及不同時期中凋亡通路的主次關(guān)系。
　　試驗設(shè)置了小鼠早期胚胎內(nèi)部ROS水平低、中、高水平3個組，首先利用DCFH-DA法、TUNEL法驗證分組的正確性（檢測2-cell、4-cell及囊胚期），其次檢測Caspase-12基因的表達，證實ROS誘導(dǎo)的小鼠早期胚胎凋亡是否有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路參與，最后檢測死亡受體通路的關(guān)鍵基因Caspase-8，線粒體凋亡通路的關(guān)鍵基因Caspase-9及Cas

3、pase-3的mRNA表達水平，探討ROS誘導(dǎo)的胚胎凋亡過程中不同凋亡通路的主次關(guān)系。
　　實驗結(jié)果表明:體外組2-cell、4-cell及囊胚期胚胎的活性氧水平均高于體內(nèi)組的胚胎，H2O2處理組的胚胎均顯著高于其他兩組(P＜0.05)，驗證了分組的正確性。H2O2處理組的凋亡指數(shù)顯著高于其他兩組、總細胞數(shù)顯著低于其他兩組(P＜0.05)，進一步驗證了隨著ROS水平的升高不僅影響了影響了凋亡指數(shù)，從而影響了胚胎的質(zhì)量，為后續(xù)更好的

4、研究提供基礎(chǔ)。其次檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路的啟動基因Caspase-12的表達，證實了Caspase-12參與活性氧引起的應(yīng)激過程。另外，無論ROS水平的高低，2-cell、4-cell期H2O2組誘導(dǎo)凋亡基因表達上調(diào)且死亡受體通路中的Caspase-8基因mRNA表達量最高;囊胚期基因表達雖然隨活性氧水平升高而增強，但mRNA表達量上并無主次之分。而相同活性氧水平下，體內(nèi)組、體外組及H2O2組的caspase-8基因表達量最高。
　　綜上