人類(lèi)鋅指蛋白家族新基因ZNF641和突觸小泡蛋白類(lèi)似新基因hSVOP的克隆與功能研究.pdf

1、　　轉(zhuǎn)錄因子在多種細(xì)胞功能中擔(dān)任了重要角色，包括細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、調(diào)亡和細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。人們已經(jīng)鑒定了幾個(gè)大的轉(zhuǎn)錄因子家族。在哺乳動(dòng)物中，鋅指蛋白是最龐大的家族。研究表明，鋅指因子能調(diào)節(jié)多種在心臟表達(dá)的基因。為了研究與心臟發(fā)育和心臟疾病相關(guān)的基因，本文從人類(lèi)胚胎心臟cDNA文庫(kù)中分離并鑒定了一個(gè)新的鋅指基因，經(jīng)國(guó)際基因命名委員會(huì)批準(zhǔn)命名為ZNF641。ZNF641定位在染色體12q13.11區(qū)帶，含一個(gè)KRAB-A框和5個(gè)C2H2型鋅指

2、。其cDNA全長(zhǎng)4906個(gè)堿基，含一個(gè)1317堿基的開(kāi)放閱讀框，編碼一個(gè)由438個(gè)氨基酸組成，分子量為49.5kDa的蛋白。Northern雜交分析表明ZNF641在成人組織中廣泛表達(dá)，其中，在骨骼肌組織有高度表達(dá)，在心臟、肝臟和胰腺中有中度表達(dá)，在大腦，腎臟和肺中沒(méi)有表達(dá)。通過(guò)構(gòu)建增強(qiáng)型綠色熒光蛋白與ZNF641融合基因的真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞系，瞬時(shí)表達(dá)后用熒光顯微鏡觀察ZNF641融合蛋白的活細(xì)胞定位及表達(dá)，證明ZNF6

3、41蛋白在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)。報(bào)告基因分析證明ZNF641是一個(gè)轉(zhuǎn)錄激活因子，結(jié)構(gòu)域分段分析表明ZNF641的KRAB-A框和C2H2鋅指之間的連接部分(linker)是其轉(zhuǎn)錄激活的關(guān)鍵序列，可能是一個(gè)新的轉(zhuǎn)錄激活子。ZNF641在COS-7細(xì)胞中過(guò)表達(dá)能激活轉(zhuǎn)錄因子AP-1與SRE的活性，這兩種因子是MAPK信號(hào)途徑介導(dǎo)的重要因子，說(shuō)明ZNF641蛋白可能在MAPK信號(hào)途徑中作為激活因子介導(dǎo)細(xì)胞功能。綜合該基因的結(jié)構(gòu)和表達(dá)特征，

4、本文初步得出結(jié)論認(rèn)為：ZNF641是參與多種人類(lèi)胚胎器官發(fā)生的鋅指轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。此外本文還從人類(lèi)cDNA文庫(kù)中分離并鑒定了一個(gè)人類(lèi)突觸小泡類(lèi)似新基因，經(jīng)國(guó)際基因命名委員會(huì)批準(zhǔn)命名為hSVOP。它類(lèi)似于突觸小泡蛋白SV2和SVOP，其cDNA序列全長(zhǎng)為3556個(gè)堿基，開(kāi)放閱讀框長(zhǎng)1646個(gè)堿基，編碼548氨基酸的蛋白質(zhì)。該基因定位在第12號(hào)染色體12q24.12區(qū)段。生物信息學(xué)分析表明其蛋白質(zhì)包含12個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域，是典型的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)。