鯽魚PKR-like Zα結構域結合核酸的分析.pdf

1、摘要摘 要螂 魚P K R 基因 ( C a P K R - I i k e ) 是 魚 類 第 一 個、 也 是 非 哺 乳 類 脊 椎 動 物 第 一 個 報道的 P K R同 源物。 該 基因編碼的蛋白N - 端沒有典型的d s R B M 區(qū)域，取而代之的是兩個Z - D N A結 合區(qū) 域( Z a i 和L a g ) . 所以， C a P K R - l i k e 是Z a 蛋白 家族成員。C a P K R - l

2、i k e可能同時具有哺乳動物類干擾素系統(tǒng)中兩種重要效應蛋白 A D A R 1和P K R結構特征。 故而對L a 結構的研究有助于 豐富對魚類細胞的抗病毒免疫反應過程和機制的認識。本文在前期工作基礎上， 將從S M A R T - c D N A文庫中克隆得到的C a P K R - T i k eL a i I L a g 及Z a l Z a 2 結 構 域c D N A 重 組至 載 體中 ， 原 核 表 達三 種融 合多

3、膚 少 z a 1 ,P z r } 及P z a l z Q a ) a 親 和層 析純化表達產(chǎn)物， 得到Z a p i m l ; x e e 凝膠阻 滯實驗分 析表達Z d P K R - t i k e 與P o l y 1 : C , 蛙r m D N A , 重組 質粒d ( C G ) 1 3 , d ( C G ) 1 3 的 親和 性。 結 果 表明 ， P z Q 1 , P z c a 及二 者的 混 合物

4、 均 不能 與 雙 鏈R N A ( P o l y I : C ) 和 蛙 精D N A 及d ( C G ) 1 3結 合。 而P z d l z o 2 與P o l y I : C 和 鮮 精D N A及d ( C G ) 1 3 有明 顯的 結 合， 而 且 隨氣: 二濃度的 增加， P o l y I : C . 魷 精D N A , 重組 質粒d ( C G ) 1 3 和d ( C G ) ” 在瓊脂 糖 凝膠電泳

5、中的阻滯作用越明顯。關鍵詞:卿魚: P K R - l i k e ; L a P K R d i k e ;親和性:核酸獨 創(chuàng) 性 聲 明獨創(chuàng)性聲明本人聲明 所呈交的 學位論 文是本人在導師指導下進行的 研究工作及取得的研 究成果。 據(jù)我所知， 除了文中 特別加以 標注和致謝的 地方外， 論文中 不包含其他 人已 經(jīng)發(fā) 表或 撰 寫 過 的 研 究 成 果 ， 也 不 包 含為 獲得 」通左 或 其 他 教 育 機 構的學位或證書而使

6、用過的材料。 與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學 位 論 文 作 者 簽 名 : 4 A - - 簽 字 F i M : a } I 年 ‘ 月 樸學位論文版 權使用授權書本 學 位論 文 作 者 完 全了 解 一 魚 立鑫 遭 ‘有 關 保留 、 使 用 學 位 論 文 的 規(guī) 定，有權保留 并向國家有關部門 或 機構 送交論文的復印件和磁 盤， 允許論文被查閱 和借閱。 本人 授權南