槲皮素-HO-1-膽紅素系統對大鼠原代肝細胞酒精性損傷的保護作用.pdf

1、研究背景：
　　 隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，酒精性肝病(alcoholic liverdisease，ALD)的發(fā)病率呈逐漸增高之勢，成為僅次于病毒性肝炎的第二大類肝病，其預防和治療也一直是世界性的重要公共衛(wèi)生問題。ALD的發(fā)病機制比較復雜，其中以氧化損傷與炎性應激學說備受關注。近來越來越多研究發(fā)現，槲皮素作為食物來源廣泛的黃酮類化合物，具有顯著的抗氧化、抗炎、抗凋亡等生物學效應，對ALD 也具有明顯的保護效應。進

2、一步的研究表明，槲皮素對ALD的保護作用與其通過誘導肝臟I 型血紅素氧合酶(heme oxygenase-1，HO-1)而進一步放大其抗氧化活性有關。
　　 然而，作為HO-1 催化血紅素分解的代謝產物之一的膽紅素，曾長期被認為是機體有毒的代謝產物。只是近年來，隨著研究的深入，學者們才發(fā)現正常生理濃度的膽紅素也具有良好的抗氧化、抗炎、抗凋亡等生物活性。但膽紅素是否參與或介導HO-1 對肝細胞酒精性損傷的保護作用，目前尚無直接相關

3、的研究報道。
　　 因此，探討HO-1 代謝產物膽紅素對酒精所致肝細胞氧化損傷與炎性應激的保護作用，不僅可進一步完善槲皮素/HO-1 拮抗酒精性肝損傷的相關作用機制，還可更好地拓展人們對膽紅素的認識。
　　 目的：
　　 1.探討槲皮素誘導HO-1 生成的膽紅素對乙醇誘導的肝細胞氧化損傷的潛在保護作用及其劑量效應關系，并探討膽紅素對乙醇誘導氧化應激所觸發(fā)的細胞凋亡是否具有拮抗效應；
　　 2.分析膽紅素對

4、肝細胞氧化、炎性雙重應激的潛在保護作用。
　　 方法：
　　 1．二步膠原酶灌注消化分離培養(yǎng)大鼠原代肝細胞，給以無水乙醇(200mmol/L，24h)誘導肝細胞氧化損傷，同時單獨或聯合給以槲皮素(100 μmol/L)、Hemin(血紅素，HO-1 誘導劑，20 μmol/L)、鋅原卟啉-IX(ZnPP-IX，HO-1 抑制劑，10 μmol/L)及不同劑量的外源性膽紅素(2、10、25、100 μmol/L)，觀察細胞

5、AST、LDH 酶的漏出、SOD 酶活性、GSH 水平、脂質過氧化產物MDA與ROS的產生及內源性直接膽紅素水平，并檢測細胞線粒體膜電位、細胞凋亡率的變化。
　　 2．在大鼠原代肝細胞經乙醇孵育(200 mmol/L)的同時，加入外源性的炎癥因子(TNF-α<5ng/ml>+IL-6＜2 ng/ml>)誘導細胞氧化與炎性雙重應激，再加入膽紅素干預，觀察上述氧化應激相關指標的變化，分析膽紅素對肝細胞酒精性氧化損傷基礎上疊加炎性應激

6、時的保護作用。
　　 結果：
　　 1．槲皮素對乙醇誘導的肝細胞AST與LDH 酶的漏出、細胞GSH與SOD的消耗、MDA與ROS的產生對均有明顯的抑制作用，并且提高了內源性膽紅素水平；血紅素表現了與槲皮素類似的效應；而HO-1 抑制劑ZnPP-IX 則明顯抑制了槲皮素的上述保護效應。
　　 2．中劑量的外源性膽紅素(25μmol/L、10 μmol/L)對乙醇誘導的肝細胞AST與LDH 酶的漏出、GSH與SOD

7、的消耗及MDA與ROS的產生也有明顯的抑制作用，而低劑量的膽紅素(2 μmol/L)則無明顯的保護作用，高劑量的膽紅素(100μmol/L)不僅本身表現出一定的細胞毒性，而且加重了乙醇的細胞毒性。
　　 3．槲皮素有效拮抗乙醇誘導的細胞線粒體膜電位下降、并降低了細胞凋亡率，血紅素表現出與槲皮素類似的效應，而ZnPP-IX 則明顯抑制了槲皮素的上述保護效應。細胞經乙醇孵育的同時給以外源性膽紅素(25μmol/L)，也有效維持了線粒

8、體膜電位水平且降低了細胞凋亡率。
　　 4．外源性炎癥因子與乙醇共同處理肝細胞時，加重了乙醇誘導的AST與LDH酶的漏出、GSH與SOD的消耗及MDA與ROS的產生。氧化、炎性雙重應激時，外源性膽紅素(25μmol/L)對細胞氧化應激相關指標的變化具有明顯的抑制作用。
　　 結論：
　　 槲皮素誘導HO-1 可抑制肝細胞酒精性氧化損傷和炎性應激，并且還能有效拮抗酒精所致的線粒體膜電位下降和細胞凋亡。此外，作為HO