PI3K-Akt信號通路對心肌缺血后處理大鼠血管內(nèi)皮功能的影響及促紅素的干預(yù).pdf

1、目的：通過大鼠急性心肌缺血再灌注模型，觀察心肌缺血后處理（ischemic postconditioning，I-PostC）及重組人促紅細(xì)胞生成素（recombinant human erythropoietin，rhEPO）對離體主動(dòng)脈條片內(nèi)皮舒縮功能、外周血一氧化氮（nitrous oxide，NO）含量、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase，NOS）活性、主動(dòng)脈組織中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（phos

2、phatidylinositol-3-kinase/Protein kinase B，P13K/Akt）mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)水平的影響，旨在研究P13K/Akt信號通路對I-PostC大鼠血管內(nèi)皮功能的影響及rhEPO的干預(yù)。
　　 方法：將42只SD雄性大鼠隨機(jī)分為7組：①假手術(shù)組（Sham組）：冠脈只穿線不結(jié)扎；②缺血/再灌注組（ischemia/reperfusion，I/R組）：冠脈結(jié)扎30min、再灌3h；③缺血后處

3、理組（I-PostC組）：于再灌注3h前進(jìn)行3次10sR/I循環(huán)；④渥漫青霉素+缺血后處理組（Wort+I-PostC）組：于3次10sR/I循環(huán)前經(jīng)頸靜脈注射Wortmannin（Wort），15 ug/kg，余同I-PostC組；⑤促紅素組（rhEPO組）：再灌注3h前，腹腔注射rhEPO，5000 U/kg：⑥Wort+rhEPO組：再灌注前，先后給予Wort和rhEPO，劑量及給藥方法同上；⑦rhEPO+I-PostC組：再灌注

4、前，腹腔注射rhEPO，5000 U/kg，并給予3次10s R/I循環(huán)。測定各組血清中NO含量、NOS活性；取胸主動(dòng)脈制成條片行離體器官灌流實(shí)驗(yàn)，測定其對去氧腎上腺素（phenylephrine，PE）的收縮反應(yīng)、對乙酰膽堿（acetylcholine，Ach）的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)和對硝普鈉（sodium nitroprusside，SNP）的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)；逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)（reversetranscriptase-pol

5、ymerase chain reaction，RT-PCR）法檢測各組主動(dòng)脈組織中Akt mRNA水平、免疫組織化學(xué)法檢測各組主動(dòng)脈組織中Akt的蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：（1）血清NO含量、NOS活性：I/R組、Wort+I-PostC組、Wort+rhEPO組較Sham組血清NO含量、NOS活性均明顯降低（P<0.05），I-PostC組、rhEPO組和rhEPO+I-PostC組血清NO含量、NOS活性較I/R組明顯增高

6、（P<0.05）；Wort+I-PostC組和Wort+rhEPO組較I-PostC組血清NO含量、NOS活性顯著降低（P<0.05）；Wort+rhEPO組較rhEPO組明顯降低（P<0.05）。rhEPO+I-PostC組較rhEPO組血清NO含量及NOS活性有增高趨勢，但差異無顯著性；I-PostC組、rhEPO組、rhEPO+I-PostC組與Sham組間兩兩比較，均未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；Wort+I-PostC組

7、、Wort+rhEPO組與I/R組間兩兩組比較，亦未見明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。（2）離體主動(dòng)脈條片內(nèi)皮舒縮功能：I/R組、Wort+I.PostC組和Wort+rhEPO組較Sham組主動(dòng)脈條片對乙酰膽堿舒張的IC50均明顯增大（P<0.05）；I-PostC組、rhEPO組、rhEPO+I.PostC組較I/R組IC50均明顯減小（P<0.05）；Wort+I-PostC組、Wort+rhEPO組較I-PostC組IC50明顯

8、增大（P<0.05）；Wort+rhEPO組較rhEPO組IC50明顯增大（P<0.05）。I-PostC組、rhEPO組、rhEPO+I-PostC組主動(dòng)脈條片對乙酰膽堿舒張的IC50均無明顯差異。而各組對PE的收縮反應(yīng)和對SNP的非內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)均無明顯差異（P>0.05）。（3）主動(dòng)脈組織中Akt mRNA表達(dá)：各組大鼠主動(dòng)脈組織均有Akt mRNA的表達(dá)，以Sham組表達(dá)最低。I-PostC組、rhEPO組、rhEPO+I-

9、PostC組較I/R組顯著增高（P<0.05）；Wort+I-PostC組、Wort+rhEPO組較I-PostC組明顯降低（P<0.05）；rhEPO組和rhEPO+I-PostC組較Wort+I-PostC組顯著增高（P<0.05）；Wort+rhEPO組較rhEPO組顯著降低（P<0.05）；mEPO+I-PostC組較Wort-rhEPO組顯著增高（P<0.05）。而I-PostC組、rhEPO組、I-PostC+rhEPO組3

10、組間及I/R組、Wort+I-PostC組、Wort+rhEPO組3組間差異均無顯著性。（4）主動(dòng)脈組織中Akt蛋白表達(dá)：各組大鼠主動(dòng)脈組織均有Akt蛋白表達(dá)，以Sham組表達(dá)最低。I-PostC組、rhEPO組、rhEPO+I-PostC組較I/R組顯著增高（P<0.05）；Wort+I-PostC組、Wort+rhEPO組較I-PostC組明顯降低（P<0.05）；rhEPO組和rhEPO+I-PostC組較Wort+I-PostC

11、組顯著增高（P<0.05）；Wort+rhEPO組較rhEPO組顯著降低（P<0.05）：rhEPO+I-PostC組較Wort+rhEPO組顯著增高（P<0.05）。而I-PostC組、rhEPO組、I-PostC組+rhEPO組3組間Akt蛋白的表達(dá)以及I/R組、Wort+I-PostC組、Wort+rhEPO組3組間Akt蛋白的表達(dá)差異均無顯著性。
　　 結(jié)論：（1）大鼠心肌IRI，可引起主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能嚴(yán)重受損。

12、（2）I-PostC能顯著改善IRI所致的主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能。（3）P13K特異性抑制劑Wort，可削弱I-PostC對主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能的改善作用，降低主動(dòng)脈織組中Akt mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)水平，提示I-PostC對IRI所致內(nèi)皮功能失調(diào)的保護(hù)作用可能與激活P13K/Akt信號通路及其下游靶點(diǎn)eNOS有關(guān)。（4）rhEPO亦能改善IRI所致的主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能，發(fā)揮與I-PostC相似的血管內(nèi)皮功能的保護(hù)作用。（