白花丹醌對(duì)肝纖維化大鼠PI3K-Akt信號(hào)通路的影響.pdf

1、目的:
　　研究白花丹醌對(duì)四氯化碳所致的大鼠肝纖維化組織的作用及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。
　　方法:
　　把40只雄性SD大鼠隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型組、2 mg/kg白花丹醌處理組和3 mg/kg白花丹醌處理組，均每組10只?？瞻讓?duì)照組按2 mL/kg給予0.9％氯化鈉溶液腹腔注射，剩下的3組均按2 mL/kg給予60％四氯化碳花生油溶液腹腔注射，共6周，均每周3次。在

2、造模后的第三周起，2組白花丹醌處理組分別給予2 mg/kg和3 mg/kg白花丹醌花生油腹腔注射，共4周，均每周2次。常規(guī)檢測(cè)血清學(xué)指標(biāo)ALT、AST、A1b，采用放射免疫法測(cè)定大鼠血清學(xué)指標(biāo)HA和LN，運(yùn)用western blot檢測(cè)肝組織中PI3K、Akt和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的蛋白表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色法觀察p-Akt的定位表達(dá)。各組間所得數(shù)據(jù)的均數(shù)比較采用單因素方差分析。各組數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理

3、，計(jì)量資料用(x)±s表示，各組樣本均數(shù)間的比較采用單因素方差分析，用Levene法檢驗(yàn)方差齊性，方差齊使用LSD-t法檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)則采用Dunnett T3法檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠肝臟組織病理學(xué)表現(xiàn):空白對(duì)照組大鼠肝組織質(zhì)地柔軟、光滑，邊緣整齊;肝小葉結(jié)構(gòu)排列正常，肝細(xì)胞索規(guī)則有序，沒有看見明顯炎性反應(yīng)、變性和壞死。模型組大鼠肝臟質(zhì)地堅(jiān)韌，顏色灰暗，表面粗糙，可以看見顆

4、粒狀小結(jié)節(jié);肝小葉結(jié)構(gòu)明顯破壞或消失，肝細(xì)胞索紊亂，肝細(xì)胞明顯腫脹，由中央靜脈區(qū)或匯管區(qū)伸出較粗大的纖維條索包繞肝組織形成假小葉。與模型組相比較，白花丹醌處理組大鼠肝臟表面比較光滑，質(zhì)地比較柔軟，肝細(xì)胞壞死及纖維組織增生減少，肝細(xì)胞水腫好轉(zhuǎn)，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞減輕。
　　2.大鼠肝臟血清生物化學(xué)指標(biāo)和纖維化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:模型組大鼠與空白對(duì)照組大鼠相比較，血清學(xué)指標(biāo)ALT、AST、HA和LN均明顯升高，A1b明顯降低，

5、差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t值分別為-28.87、-27.64、-56.04、-18.13、14.03，均P＜0.05）;2 mg/kg白花丹醌處理組與模型組相比較，血清學(xué)指標(biāo)ALT、AST、HA、LN水平均明顯下降，A1b升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為13.35、16.12、32.45、4.72、-6.58，均P＜0.05);3 mg/kg白花丹醌處理組和2 mg/kg白花丹醌處理組相比較，血清學(xué)指標(biāo)ALT、AST、HA、LN水平也明

6、顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t值分別為3.21、5.03、7.33、2.79，均P＜0.05)，而血清A1b則無(wú)明顯變化。
　　3.肝組織中PI3K、Akt、p-Akt的表達(dá):各組大鼠肝組織中PI3K、Akt的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F值分別為2.324、1.983，P＞0.05）;空白對(duì)照組、模型組、2 mg/kg白花丹醌處理組和3 mg/kg白花丹醌處理組大鼠的p-Akt蛋白表達(dá)量分別為0.0821±0.0003、0.7374±

7、0.0037、0.3679±0.0332和0.1327±0.0561，在肝纖維化模型組中的表達(dá)高于空白對(duì)照組(t=851.302，P＜0.05)，白花丹醌處理后下降(t值分別-71.858和28.363，均P＜0.05)。免疫組化染色顯示，p-Akt蛋白表達(dá)陽(yáng)性為細(xì)胞核染成棕黃色，陰性為細(xì)胞核染成淡藍(lán)色。p-Akt蛋白表達(dá)主要集中在肝細(xì)胞核中?？瞻讓?duì)照組大鼠肝組織p-Akt蛋白少量表達(dá)于匯管周圍，在肝細(xì)胞內(nèi)幾乎沒有表達(dá);模型組大鼠p-A