SCF和G-CSF對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在心肌梗死大鼠體內(nèi)遷移影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)尾靜脈向心肌梗死大鼠移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,探討SCF和G-CSF對(duì)MSCs歸巢到心肌梗死區(qū)的作用,并驗(yàn)證在梗死心肌組織中定向分化為心肌細(xì)胞的可能性及安全性,為干細(xì)胞移植技術(shù)用于心肌梗死的臨床治療提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 [方法]
　　 無(wú)菌條件下取出大鼠雙側(cè)股骨,沖洗骨髓腔獲得骨髓細(xì)胞,貼壁篩選法純化MSCs并進(jìn)行體外培養(yǎng)擴(kuò)增。結(jié)扎法建立大鼠心肌梗死模型,采用DAPI標(biāo)記細(xì)胞,于心肌梗死模型建立

2、一周后尾靜脈注入心肌梗塞模型鼠,根據(jù)分組情況,于細(xì)胞移植前后三天皮下注射SCF和G-CSF。在移植MSCs四周后處死大鼠,心臟冰凍切片觀察心肌梗死區(qū)移植細(xì)胞的分布情況,采用計(jì)數(shù)方法比較注射不同細(xì)胞因子組的MSCs數(shù)量,熒光免疫組化檢測(cè)植入MSCs肌鈣蛋白(cTnI)的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.采用貼壁刷選法可獲得較純的MSCs,體外培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞呈梭形貼壁生長(zhǎng),擴(kuò)增速度快,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記物,CD29和C

3、D44陽(yáng)性率分別為94.1％和92.6%,CD34和CD45陽(yáng)性率分別為3.3%和4.1%,細(xì)胞形態(tài)均一,數(shù)量足夠,可滿足細(xì)胞移植需要。
　　 2.結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支可成功建立大鼠急性心肌梗死動(dòng)物模型,結(jié)扎血管遠(yuǎn)端供血區(qū)心肌組織顏色蒼白,心電圖動(dòng)態(tài)檢測(cè)到ST段持續(xù)性抬高及病理組織切片作為模型制作成功的標(biāo)志,該方法的結(jié)扎成功率為56%。
　　 3.DAPI細(xì)胞標(biāo)記率為100%,敏感性和特異性高。
　　 4.MSC

4、s植入四周后冰凍切片,熒光顯微鏡下觀察,MSCs遷移至梗死心肌組織,MSCs組、SCF組、G-CSF組遷移至梗死心肌組織的MSCs數(shù)量沒(méi)有明顯區(qū)別(P＞0.05),SCF+G-CSF組的MSCs數(shù)量明顯高于其它三組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。免疫熒光組織化學(xué)顯示,植入的部分MSCs表達(dá)心肌特異蛋白cTnI。
　　 結(jié)論：
　　 1.貼壁培養(yǎng)法可分離擴(kuò)增得到高純度,足夠數(shù)量的MSCs,該方法簡(jiǎn)單易行。