骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和內(nèi)皮祖細(xì)胞聯(lián)合移植對(duì)大鼠急性心肌梗死的作用研究.pdf

1、目的：觀察經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）和內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs) 移植對(duì)急性心肌梗死大鼠心功能、心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子基因、心肌細(xì)胞標(biāo)志性蛋白含量、心臟梗死區(qū)毛細(xì)血管密度的影響，比較聯(lián)合移植MSCs和EPCs是否比單用其中一種細(xì)胞移植效果更好，MSCs和EPCs兩種細(xì)胞移植效果之間是否有差異。
　　 方法：1.取2周

2、的清潔級(jí)健康SD大鼠，提取骨髓，通過(guò)密度剃度離心法提取單個(gè)核細(xì)胞，差速貼壁法和不同培養(yǎng)基誘導(dǎo)法獲得MSC和EPC。流式細(xì)胞術(shù)篩選，使MSCs和EPCs得以純化。用 DAPI（終濃度為50mg/L）標(biāo)記MSCs和EPCs。觀察兩種細(xì)胞形態(tài)。2.通過(guò)結(jié)扎大鼠冠脈左前降支建立心肌梗死模型。3.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及細(xì)胞移植: 將已經(jīng)制好心肌梗死模型的SD大鼠隨機(jī)進(jìn)行分組進(jìn)行細(xì)胞移植。A組：MSCs移植組 心梗模型建成后1周經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射移植已標(biāo)記

3、好的MSCs細(xì)胞懸液200ul（5x106）；B組：EPCs移植組 心梗模型建成后1周經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射移植已標(biāo)記好的EPCs 200ul（5x106）；C組：聯(lián)合移植組 心梗模型建成后1周經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射移植已標(biāo)記好的MSCs細(xì)胞5x106和EPCs（5x106）；D組：對(duì)照組 心梗模型建成后1w經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射培養(yǎng)液DMEM200ul。4.細(xì)胞移植后4周測(cè)心臟血流動(dòng)力學(xué)，隨后處死大鼠取心臟標(biāo)本，作石蠟切片，熒光顯微鏡下觀察DAP

4、I標(biāo)記的MSCs和EPCs并計(jì)數(shù)，用Ⅷ因子免疫組化檢測(cè)毛細(xì)血管密度，用免疫組化測(cè)心肌肌鈣蛋白I和縫隙連接蛋白43，提取心肌組織RNA,測(cè)心肌轉(zhuǎn)錄因子基因。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)。多個(gè)均數(shù)間比較用單因素方差分析。若符合方差齊性，進(jìn)一步兩兩比較采用Bonferroni檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)兩兩比較采用Tamhane’s T2法。P<0.05為差異有顯著性意義。
　　 結(jié)果：1.通過(guò)差速貼壁

5、分離培養(yǎng)法得到較純的間充質(zhì)干細(xì)胞及內(nèi)皮祖細(xì)胞。2.MSCs移植組、EPCs移植組及聯(lián)合移植組內(nèi)均可見到DAPI標(biāo)記的細(xì)胞，同時(shí)與對(duì)照組相比其毛血管密度增加，左心室舒張末壓（LVEDP)下降，左心室收縮壓（LVSP）、左心室壓力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA-4和VEGF基因半定量及心肌肌鈣蛋白I和縫隙連接蛋白43含量明顯增高（P<0.05）。3.細(xì)胞移植組之間相比，聯(lián)合移植組上述指標(biāo)改變更明顯；內(nèi)皮