骨髓間充質(zhì)干細胞和內(nèi)皮祖細胞聯(lián)合移植對大鼠急性心肌梗死的作用研究.pdf

1、目的：觀察經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射骨髓間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells,MSCs）和內(nèi)皮祖細胞（endothelial progenitor cells，EPCs) 移植對急性心肌梗死大鼠心功能、心肌細胞轉(zhuǎn)錄因子基因、心肌細胞標(biāo)志性蛋白含量、心臟梗死區(qū)毛細血管密度的影響，比較聯(lián)合移植MSCs和EPCs是否比單用其中一種細胞移植效果更好，MSCs和EPCs兩種細胞移植效果之間是否有差異。
　　 方法：1.取2周

2、的清潔級健康SD大鼠，提取骨髓，通過密度剃度離心法提取單個核細胞，差速貼壁法和不同培養(yǎng)基誘導(dǎo)法獲得MSC和EPC。流式細胞術(shù)篩選，使MSCs和EPCs得以純化。用 DAPI（終濃度為50mg/L）標(biāo)記MSCs和EPCs。觀察兩種細胞形態(tài)。2.通過結(jié)扎大鼠冠脈左前降支建立心肌梗死模型。3.實驗動物分組及細胞移植: 將已經(jīng)制好心肌梗死模型的SD大鼠隨機進行分組進行細胞移植。A組：MSCs移植組 心梗模型建成后1周經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射移植已標(biāo)記

3、好的MSCs細胞懸液200ul（5x106）；B組：EPCs移植組 心梗模型建成后1周經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射移植已標(biāo)記好的EPCs 200ul（5x106）；C組：聯(lián)合移植組 心梗模型建成后1周經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射移植已標(biāo)記好的MSCs細胞5x106和EPCs（5x106）；D組：對照組 心梗模型建成后1w經(jīng)心外膜心肌內(nèi)注射培養(yǎng)液DMEM200ul。4.細胞移植后4周測心臟血流動力學(xué)，隨后處死大鼠取心臟標(biāo)本，作石蠟切片，熒光顯微鏡下觀察DAP

4、I標(biāo)記的MSCs和EPCs并計數(shù)，用Ⅷ因子免疫組化檢測毛細血管密度，用免疫組化測心肌肌鈣蛋白I和縫隙連接蛋白43，提取心肌組織RNA,測心肌轉(zhuǎn)錄因子基因。5.統(tǒng)計學(xué)處理：所有實驗數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS13.0軟件處理數(shù)據(jù)。多個均數(shù)間比較用單因素方差分析。若符合方差齊性，進一步兩兩比較采用Bonferroni檢驗，方差不齊時兩兩比較采用Tamhane’s T2法。P<0.05為差異有顯著性意義。
　　 結(jié)果：1.通過差速貼壁

5、分離培養(yǎng)法得到較純的間充質(zhì)干細胞及內(nèi)皮祖細胞。2.MSCs移植組、EPCs移植組及聯(lián)合移植組內(nèi)均可見到DAPI標(biāo)記的細胞，同時與對照組相比其毛血管密度增加，左心室舒張末壓（LVEDP)下降，左心室收縮壓（LVSP）、左心室壓力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、心肌特異性轉(zhuǎn)錄因子GATA-4和VEGF基因半定量及心肌肌鈣蛋白I和縫隙連接蛋白43含量明顯增高（P<0.05）。3.細胞移植組之間相比，聯(lián)合移植組上述指標(biāo)改變更明顯；內(nèi)皮