注射用穿心鏈內酯對大鼠重癥急性胰腺炎的作用及機制研究.pdf

1、目的:通過靜脈注射穿心蓮內酯，觀察其對重癥急性胰腺炎(severeacute pancreatitis，SAP)大鼠胰腺組織中核因子-κB(nuclear transcriptionfactor-κB，NF-κB)表達的影響，以及腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor-α，TNF-α)在血清中的含量變化，探討穿心蓮內酯對大鼠SAP的治療作用及相關機制，為其在臨床SAP的廣泛應用提供實驗依據(jù)。
　　方法:健康SD

2、雌性大鼠30只，體重為200～250克，隨機分為三組:假手術組（sham-operation group，SO組），重癥急性胰腺炎模型組(severe acutepancreatitis model group，SAP組)、穿心蓮內酯干預組（andrographolidetreatment group，AND組），每組10只，在實驗開始前禁食12h，不禁水。腹腔注射1％的戊巴比妥鈉3ml/kg將大鼠麻醉充分后，SAP組和AND組采用3.

3、5％?；悄懰徕c(0.1 ml/100g)逆行胰膽管注射(注射速度為0.2ml/min)建立重癥急性胰腺炎大鼠模型，SO組開腹僅翻動腸管后即關腹。造模成功后，AND組于模型制備成功后立即給予穿心蓮內酯(5ug/g)尾靜脈注射。SAP組則采用相同方法給予同等劑量的生理鹽水尾靜脈注射。造模6h后采用下腔靜脈抽血，隨后處死各組大鼠。肉眼觀察并記錄各組大鼠胰腺組織大體形態(tài)、胰周及腹腔腹水情況;檢測各組大鼠血清淀粉酶（Amylase，AMY）水平;

4、各組大鼠血清TNF-α的含量采用雙抗體夾心ELISA法進行測定;對HE染色后的各組大鼠胰腺組織進行病理學評分;兩步免疫組化法（PV法）測定各組大鼠NF-κB p65蛋白在胰腺組織的表達情況。所有實驗所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(-x±s)的格式表示，結果采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析。多組樣本比較采用方差分析，檢驗水準α=0.05，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:1、各組大鼠血清淀粉酶水平的變化:在造模后6h

5、，SAP組與AND組血清淀粉酶水平則明顯升高，SO組血清淀粉酶值無明顯改變(P＜0.05)，AND組血清淀粉酶水平較SAP組明顯降低(P＜0.05)。2、胰腺組織病理改變:(1)肉眼觀察:SO組解剖后，胰腺組織形態(tài)未見明顯異常改變，SAP組可見胰腺組織變灰白色，有明顯的充血水腫，局部可見暗紅色出血灶及灰褐色壞死灶，胰周可見皂化斑，并與周圍有粘連，胃腸有脹氣，腹腔有血性腹水，這說明牛黃膽酸鈉逆行胰膽管注射誘導的重癥急性胰腺炎大鼠模型成功建

6、立。AND組解剖后，可見淡黃色腹水，胰腺組織也有充血水腫，未見明顯出血樣改變，胃腸有少許脹氣，偶可見胰周有少許皂化斑，與胰周無明顯粘連等改變，但與SAP組相比較，程度明顯減輕，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。(2)光鏡下觀察:HE染色后，SO組大鼠胰腺組織在光鏡下可見其結構完整，未見充血水腫、壞死、出血等改變，胰腺間質內也未見炎癥細胞浸潤、滲出等，而SAP組可見其正常的胰腺組織結構被破壞，小葉結構紊亂，葉間隔、小葉間隔增寬，腺泡腫脹

7、，局部可見出血及壞死，間質內有大量炎癥細胞浸潤。AND組也可見葉間隔及小葉間隔有所增寬，胰腺腺泡細胞腫脹，有少許炎癥細胞浸潤，但未見明顯的壞死及出血，胰腺組織病理改變較SAP組不同程度減輕。(3)胰腺組織病理學評分:SAP組與AND組胰腺組織病理學評分均高于SO組(P＜0.05)，AND組較SAP組低(P＜0.05)。3、ELISA法測定各組大鼠血清TNF-α的結果:SO組TNF-α水平無明顯改變，而SAP組與AND組較SO組明顯升高(

8、P＜0.05)，AND組與SAP組相比較血清TNF-α水平有所降低(P＜0.05)。4、各組大鼠胰腺組織NF-κB p65蛋白的表達:NF-κB p65在SO組大鼠胰腺組織中無明顯的陽性表達，而在SAP組胰腺組織中具有高表達，細胞核為其陽性表達的主要位置，同時在細胞質中也有少許表達，棕黃色、深棕色為其陽性表達染色，AND組及SAP組胰腺組織中NF-κB p65蛋白的表達較SO組明顯增多(P＜0.05)，但AND組與SAP組相比較，NF-

9、κB p65蛋白的表達減弱，染色變淡(P＜0.05)。
　　結論:1、經穿心蓮內酯治療后，SAP大鼠胰腺組織的病理損傷減輕，血清淀粉酶也下降，對SAP具有治療作用。2、穿心蓮內酯可以減少SAP大鼠促炎因子TNF-α的大量釋放。3、穿心蓮內酯可以抑制SAP大鼠胰腺組織NF-κB p65的活化表達。4、穿心蓮內酯能夠通過抑制SAP大鼠胰腺組織NF-κB的表達，減少促炎因子TNF-α的表達，從而達到治療SAP的作用，這可能為穿心蓮內酯治