HBV cccDNA水平及臨床因素對(duì)判斷肝細(xì)胞癌術(shù)后預(yù)后的價(jià)值.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是發(fā)病率高、預(yù)后差的惡性腫瘤之一。術(shù)后高復(fù)發(fā)率是最終導(dǎo)致患者死亡的重要原因，嚴(yán)重影響HCC的預(yù)后。尋找復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)因素，從而采取有效措施預(yù)防和治療復(fù)發(fā)是提高術(shù)后生存率的最重要策略之一。現(xiàn)有研究表明，肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)相關(guān)的主要預(yù)后因素包括：腫瘤大小、結(jié)節(jié)數(shù)目、血管浸潤、腫瘤有無包膜、術(shù)前AFP、轉(zhuǎn)氨酶水平、術(shù)中有無輸血及HBV感染等。
　　目的：利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR

2、的方法檢測(cè)肝組織及血清HBV共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(covalentlyclosedcircularDNA，cccDNA)水平，探討HBVcccDNA水平及臨床因素對(duì)肝細(xì)胞癌術(shù)后預(yù)后的影響。
　　方法：收集60例自2003年12月-2006年8月住院的乙型肝炎相關(guān)HCC患者，記錄患者術(shù)前Child-Pugh分級(jí)、是否肝硬化、AFP、腫瘤數(shù)目、大小、生長(zhǎng)方式等指標(biāo)，所有病例均留取新鮮的癌組織、癌旁組織和外周血標(biāo)本，于-80℃冰箱保存。5

3、5例獲得完整隨訪，肝組織DNA以限制性內(nèi)切酶HindⅢ聯(lián)合質(zhì)粒安全的ATP依賴DNA酶(Plasmid-Safe-ATP-DependentDNase，PSAD)進(jìn)行消化，然后采用熒光定量PCR檢測(cè)HBVcccDNA和HBVDNA；分析其與臨床、病理特征等指標(biāo)對(duì)無瘤生存率、總體生存率的影響。累積生存率計(jì)算采用壽命表法；單因素分析采用Kaplan-Meier，將單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的變量引人Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析，P<0.05為差異有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：60例患者中男性51人，女性9人，平均年齡53.37+11.49歲，5例無完整的隨訪資料。55例隨訪資料完整的患者，最長(zhǎng)隨訪時(shí)間88個(gè)月，1、3、5年總體生存率為73％、51％和38％，中位總體生存期36.3個(gè)月，生存期超過6年9例，生存期超過7年2例；1、3、5年無瘤生存率為63％、29％和19％，中位無瘤生存期16.0個(gè)月。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析表明，血清HBVcccDNA僅有1例陽性(1/35)，肝癌組

5、織HBVcccDNA陽性率20.0％(11/55)，根據(jù)13F(總HBVDNA引物)、13F+PSAD、13F+內(nèi)切酶+PSAD、71F(HBVcccDNA選擇性引物)、71F+PSAD、71F+內(nèi)切酶+PSAD組間定量結(jié)果比較，選擇性引物、PSAD和HindⅢ內(nèi)切酶三者聯(lián)合應(yīng)用，可降低約5個(gè)數(shù)量級(jí)的非特異擴(kuò)增。癌組織、癌旁組織總HBVDNA、HBVcccDNA之間均存在正相關(guān)(r=0.437、0.478，P<0.05)；外周血總HBV

6、DNA與癌組織HBVcccDNA呈低度正相關(guān)性(r=0.359，P<0.001)，與癌旁組織HBVcccDNA無相關(guān)性(r=0.264，P=0.052)。HBsAg(-)占20％(11/55)，11例HBsAg(-)病例癌及癌旁組織中HBVDNA檢出率100％。HBsAg(+)組肝癌及癌組織HBVDNA水平較較HBsAg(-)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002、0.045)，而HBsAg(+)組肝癌及癌組織HBVcccDNA水平較HBs

7、Ag(-)組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.068、0.435)。單因素分析顯示術(shù)前AFP水平(P=0.039)、生長(zhǎng)方式(P<0.001)、腫塊數(shù)目(P<0.005)、血管侵犯(P<0.001)、TNM分期(P=0.007)、腫塊直徑(P=0.028)是影響術(shù)后總體生存率的預(yù)后因素。Cox模型多因素分析顯示腫塊數(shù)目(P=0.011)、血管侵犯(P=0.001)是影響術(shù)后總體生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。單因素分析顯示癌組織HBVcccDNA水平(P

8、=0.028)、術(shù)前AFP水平(P=0.021)、生長(zhǎng)方式(P=0.019)、腫塊數(shù)目(P=0.006)、血管侵犯(P=0.048)、TNM分期(P=0.027)、病理分級(jí)(P=0.030)是術(shù)后無瘤生存率的預(yù)后因素。Cox模型多因素分析顯示，癌組織HBVcccDNA水平(P=0.007)、生長(zhǎng)方式(P=0.002)是影響術(shù)后無瘤生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。
　　結(jié)論：本研究表明利用內(nèi)切酶及PSAD消化肝組織DNA聯(lián)合HBVcccDNA