不同分子量縮合單寧的分離及其對瘤胃體外發(fā)酵的影響.pdf

1、本試驗以延邊地區(qū)野生牧草為原料，進行縮合單寧的分離，并進行分子量和分子結構的測定，探討其對蛋白質的作用效果，并添加到飼料底物中，進行體外發(fā)酵試驗，研究不同來源、不同分子量的縮合單寧對體外發(fā)酵參數(shù)的影響，從單寧分子的角度闡釋其對瘤胃發(fā)酵過程的影響，為縮合單寧在保護過瘤胃蛋白的進一步應用上提供科學依據(jù)。
　　實驗一：牧草中縮合單寧的提取、純化、分離及分析
　　本試驗測定了延邊地區(qū)四種天然含單寧植物中縮合單寧(CT)、水溶性單寧(

2、SCT)、蛋白結合單寧(PCT)以及纖維結合單寧(FCT)的含量。然后以其中的山野豌豆葉片和細葉胡枝子葉片為原材料，研究其縮合單寧的提取工藝條件，并對縮合單寧進行純化，再用凝膠色譜手段對縮合單寧按照分子量進行分離，最后采用質譜方法估測牧草中縮合單寧的聚合度、分子結構及平均分子量，分析延邊地區(qū)不同野生植物中縮合單寧的分子質量及其結構特點。另外，還測定了不一樣的分子量縮合單寧的結合蛋白質的能力大小。
　　結果表明：不同植物之間縮合單寧

3、含量的差異巨大，平均含量從3.4 g/kg至88.6 g/kg不等。提取山野豌豆葉片中縮合單寧的料液比為1:40，萃取液用量為2:2；細葉胡枝子的料液比為1:30，萃取液用量為2:3，冷浸提時間均為4小時。測得的山野豌豆的最高聚合度為七聚體，最高分子量為1952Da；細葉胡枝子為十聚體，最高分子量為2850Da。從推斷結構上看，這兩種植物葉片中的縮合單寧都不是由單一的聚合單元聚合而成的，兩種牧草中均含有原翠雀定、原花青定和原天竺葵定三種

4、基本單元，而且都包含取代基棓?；?。山野豌豆葉片中縮合單寧分離得到三部分的平均分子量從大到小依次為915.60 Da、783.94 Da、456.37 Da；細葉胡枝子葉片中縮合單寧分離得到三部分的平均分子量從大到小依次為1368.57 Da、886.32 Da、607.14 Da?？s合單寧與牛血清白蛋白作用的結果顯示，相同植物來源的縮合單寧，分子量越大，與蛋白質結合的能力越強。
　　實驗二：體外研究不同分子量的縮合單寧對瘤胃發(fā)酵參

5、數(shù)的影響
　　在體外發(fā)酵底物中添加3％上述六種不同分子量的縮合單寧，分別
　　標記為V1組(915.60 Da)、V2組(783.94 Da)、V3組(456.37 Da)、L1組(1368.57 Da)、L2組(886.32 Da)、L3組(607.14 Da)。體外培養(yǎng)24h后測定各處理組的pH值、體外消化率、產(chǎn)氣效果、氨態(tài)氮(NH3-N)、微生物蛋白(MCP)和揮發(fā)性脂肪酸(VFA)。
　　培養(yǎng)過程中，添加縮合單

6、寧各組的pH值高于對照組，但培養(yǎng)至24h時，差異并不顯著。而氣體產(chǎn)量在整個培養(yǎng)過程中差異顯著，所有添加縮合單寧的處理組的總產(chǎn)氣量均顯著低于對照組，甲烷產(chǎn)量除3h外的其他發(fā)酵階段同樣均顯著低于對照組。氨態(tài)氮與細菌蛋白在培養(yǎng)過程中含量均低于對照組，并且隨著培養(yǎng)時間的延長，差異逐漸減小，而且縮合單寧分子量最小的V3組在培養(yǎng)時間達到9h后，與對照組差異不再顯著?？倱]發(fā)性脂肪酸和乙酸產(chǎn)量最低的組為單寧分子量最大的L1組，其次為V1組和L2組，在整