Tnfr基因敲除小鼠Mdr和Mrp2表達(dá)對腸外營養(yǎng)肝損害的影響.pdf

1、目的：
　　探討TNF-α是否通過調(diào)控Mdr和/或Mrp2進(jìn)而導(dǎo)致肝臟膽汁淤積;并通過抗TNF-α單克隆抗體干預(yù)實(shí)驗(yàn)和Tnfr-/-小鼠PNAC模型，研究其能否通過調(diào)控上述基因表達(dá)防止PN相關(guān)肝損害。
　　方法：
　　將雄性6-8周齡C57BL/6J野生型小鼠30只隨機(jī)分為3組:TPN+mAb(抗TNF-α單克隆抗體)組、PN1組和對照1組（對照組），每組10只;將雄性6-8周齡Tnfr-/-小鼠20只隨機(jī)分為PN2組

2、和對照2組（對照組）。小鼠麻醉后行頸靜脈插管，使用自制旋轉(zhuǎn)輸液裝置，微泵持續(xù)24小時(shí)輸注營養(yǎng)液或生理鹽水。7天后過量麻醉處死，取血樣和肝組織標(biāo)本。進(jìn)行血清肝功能指標(biāo)分析、TNF-α及其受體TNFR濃度測定;肝組織病理檢查、肝組織樣本TNF-α及其受體Tnfr、Mdr1、Mdr2與Mrp2mRNA和蛋白表達(dá)檢測。
　　實(shí)驗(yàn)研究分為以下三個(gè)部分:
　　1.TPN所致肝損害小鼠模型建立，作為整個(gè)研究的基礎(chǔ)。
　　2.抗TNF

3、-α單克隆抗體防治小鼠PN相關(guān)肝損害的實(shí)驗(yàn)研究，應(yīng)用TNF-α抗體驗(yàn)證TNF-α在PN相關(guān)肝損害發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　3.TnfrⅠ基因敲除小鼠PN治療后的肝Mdr1、Mdr2和Mrp2表達(dá)及意義，從而探討TnfrⅠ基因缺失對PN相關(guān)肝損害的保護(hù)意義。
　　結(jié)果：
　　野生型小鼠PN1組的血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT，AST)、直接膽紅素(Dbi1)和膽汁酸(BA)水平明顯高于對照組，提示存在PNAC早期病變，且小鼠肝Mdr1

4、、Mdr2與Mrp2表達(dá)下降。加用抗TNF-α單克隆抗體的PN組小鼠血清指標(biāo)更接近正常，小鼠肝Mdr1、Mdr2與Mrp2表達(dá)上升，同時(shí)TnfrⅠ基因表達(dá)增強(qiáng)。Tnfr-/-小鼠經(jīng)腸外營養(yǎng)7天后，沒有出現(xiàn)PNAC病理和生化改變，也沒有顯著的肝Mdr1、Mdr2與Mrp2表達(dá)改變。
　　1.TPN所致肝損害小鼠模型建立:
　　TPN組的ALT、AST、Dbi1和BA水平顯著高于對照組(P＜0.05)，病理學(xué)檢查顯示TPN組出現(xiàn)

5、肝細(xì)胞變性壞死、膽汁淤積，但兩組間病理評分無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.抗TNF-α單克隆抗體防治小鼠PN相關(guān)肝損害的實(shí)驗(yàn)研究:PN1組小鼠的ALT、AST、Dbi1和BA水平顯著高于對照組(P＜0.05)，提示存在膽汁淤積早期改變;而抗TNF-α單克隆抗體（英夫利昔）的應(yīng)用可改善PN小鼠血清Dbi1和白蛋白(ALB)水平，兩組指標(biāo)的差異有顯著性(P＜0.05)，此外，TPN+mAb組小鼠血清ALT和BA也低于PN組小鼠，但差異不顯著。

6、同時(shí)，PN1組小鼠肝組織Mdr1、Mdr2和Mrp2mRNA表達(dá)明顯低于對照組(P＜0.05)，而TPN+mAb組小鼠肝組織Mdr1、Mdr2和Mrp2mRNA表達(dá)較PN1組有改善，兩組之間的差異有顯著性(P＜0.05)。
　　3.TnfrⅠ基因敲除小鼠PN應(yīng)用的肝Mdr1、Mdr2和Mrp2表達(dá)及意義:Tnfr-/-小鼠PN組的肝大體形態(tài)基本正常，無肝細(xì)胞變性壞死及膽汁淤積;血清ALT、ALB、Tbi1、Dbi1和BA水平，肝M

7、dr1、Mdr2、Mrp2mRNA表達(dá)，以及肝TNF-α基因和蛋白表達(dá)與同質(zhì)對照組小鼠無顯著差異(P＞0.05)。PN2組（Tnfr-/-）小鼠與PN1組（野生型）比較，PN2組小鼠血清ALT和BA明顯低于PN1組，而ALB濃度明顯高于PN1組;PN2組小鼠肝Mdr2、Mrp2mRNA表達(dá)略高于PN1組。
　　結(jié)論：
　　野生型PN小鼠肝組織Mdr1、Mdr2與Mrp2表達(dá)發(fā)生變化，這有助于研究PN相關(guān)肝損傷的分子機(jī)制。而這

8、種變化在Tnfr-/-小鼠中則不明顯，提示TNF-α及其受體可能通過調(diào)控肝Mdr1、Mdr2與Mrp2的表達(dá)對PNALD的發(fā)病產(chǎn)生影響。而抗TNF-α單克隆抗體（英夫利昔）在防治PNALD方面有應(yīng)用前景，在投入臨床并推廣前，尚需擴(kuò)大觀察樣本量，進(jìn)一步證實(shí)安全性和適用時(shí)機(jī)。
　　1.小鼠TPN組與常見于嬰幼兒的PNAC早期血清學(xué)檢查結(jié)果相似，從而為PNALD分子水平研究確立動物模型載體。
　　2.抗TNF-α單克隆抗體（英夫利