過氧化氫對血管收縮功能的抑制作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的:過氧化氫(H2O2)作為機(jī)體內(nèi)主要的氧化反應(yīng)的代謝產(chǎn)物可以自由穿過細(xì)胞膜,并作為一種信息傳遞分子在血管內(nèi)起作用。目前H2O2對血管作用的體外研究大多數(shù)局限于探討它的瞬時影響,而它的長效作用則報道較少。我們的前期實(shí)驗(yàn)表明mTOR信號通路抑制劑雷帕霉素(rapamycin,rapa)可以保護(hù)H2O2長效處理造成的不可逆收縮功能的喪失,而其機(jī)理尚不明確,同時有文獻(xiàn)報道H2O2可以激活mTOR信號通路,因此,我們擬對H2O2對血管收縮功能

2、的影響與mTOR通路的關(guān)系進(jìn)行研究,同時探討H2O2對血管收縮功能影響的潛在作用機(jī)制。
　　 方法:通過肌電描記器系統(tǒng)(Myograph)記錄各種不同藥物對H2O2長效處理所造成的血管收縮功能喪失作用的影響,同時采用蛋白免疫印記法(westernblot)對各種藥物處理后組織中40s核糖體蛋白S6激酶(p70s6k)的磷酸化水平和肌球蛋白輕鏈(MLC20)的磷酸化水平進(jìn)行檢測,并且采用ENZO公司的鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶活性測定試劑盒對

3、鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin,PP2B,CaN)的活性進(jìn)行檢測。
　　 結(jié)果:
　　 1.rapa(20μM)可以保護(hù)H2O2(200μM)處理3 h造成的不可逆收縮功能的喪失(rapa+H2O2:55.5±11.7％(50 mM KCl),65.3±24.1％(1μM PE)VS H2O2:13.9±4.8％(50μM KCl),10.44±2.8％(1μM PE),p<0.05,n=4)；
　　 2

4、.H2O2(200μM)處理3 h沒有使p70s6k的磷酸化水平發(fā)生變化(H2O2:96.8±36.2％VS空白:100％,p>0.05,n=3)；
　　 3.H2O2(200μM)處理3 h使MLC的磷酸化水平發(fā)生變化,同時rapa對這種變化產(chǎn)生了影響(空白:100％；H2O2:12.44±0.9％；rapa+H2O2:39.7±8.4％,P<0.05,n=3)；
　　 4.H2O2(200μM)處理3 h使PP2B的

5、活性發(fā)生了變化,同時環(huán)孢素A(CiclosporinA,CsA)與rapa均對這種變化產(chǎn)生了影響(空白:0.256±0.052；H2O2:0.402±0.059；rapa+H2O2:0.226±0.074；CsA+H2O2:0.131±0.026,p<0.05,n=3)
　　 結(jié)論:
　　 1)在H2O2造成的血管收縮功能喪失過程中,rapa能起到一定的保護(hù)作用,并且這種保護(hù)作用與H2O2的濃度和處理時間有關(guān),但rapa