延遲相缺血預(yù)處理和缺血后處理對心臟缺血再灌注損傷保護作用的實驗研究.pdf

1、第一部分
　　 【目的】為研究缺血預(yù)適應(yīng)機制，評價心肌缺血再灌注損傷藥物療效等相關(guān)研究提供理想的實驗?zāi)Ｐ汀?br>　　 【方法】共30只雄性C57BL/6小鼠，其中20只用于建立缺血再灌注損傷模型，10只作為假手術(shù)組。C57BL/6 麻醉開胸后，用7/0醫(yī)用單絲線穿過心臟冠狀動脈左前降支（LAD）下方, 結(jié)扎LAD 30分鐘后，剪開縫線，關(guān)閉胸腔，待小鼠蘇醒后撤離呼吸機。
　　 【結(jié)果】行30分鐘LAD結(jié)扎術(shù)后再灌注模

2、型組存活率為19/20；假手術(shù)組存活率為10/10。經(jīng)過氯化三苯四氮唑（TTC）和伊文思藍染色，測量30分鐘I/R實驗組中缺血危險區(qū)為59.5±0.9％，假手術(shù)組缺血危險區(qū)為60.7±1.1％；30分鐘I/R實驗組梗死面積為32.2±0.7％，假手術(shù)組無心肌無梗死形成【結(jié)論】采用本方法制作小鼠心肌缺血/再灌注損傷模型成功率高，且操作簡單，創(chuàng)傷小。
　　 第二部分
　　 【目的】心肌缺血預(yù)處理根據(jù)對缺血心肌起保護作用的時間

3、分為缺血預(yù)處理的早期相和延遲相。近年來，大量的研究表明缺血預(yù)處理延遲相出現(xiàn)在缺血預(yù)處理后24小時,對心臟保護持續(xù)時間長,保護范圍廣。但是缺血預(yù)處理延遲相對心肌組織中的氧分壓的影響和其作用機制尚不清楚。因此，我們通過建立小鼠缺血再灌注損傷模型，研究缺血預(yù)處理延遲相是否通過降低再灌注后心肌組織中氧分壓水平保護線粒體功能減輕氧化應(yīng)激損傷，從而減少梗死面積的形成。
　　 【方法】小鼠隨機分為假手術(shù)組，單純?nèi)毖A(yù)處理組（5分鐘缺血/5分鐘

4、再灌，共3個循環(huán)，LPC），單純?nèi)毖俟嘧⒔M（30分鐘缺血后再灌60分鐘或24小時，I/R）和缺血預(yù)處理延遲相組（LPC+I/R）。心肌組織中的氧分壓通過電子順磁共振（EPR）測量，局部血流量通過激光多普勒方式測量，線粒體活性通過電子傳遞鏈復(fù)合酶活性反映，心肌梗死面積通過TTC和伊凡思藍雙染色進行定量。
　　 【結(jié)果】在I/R實驗組中，再灌注后心肌組織中的氧分壓升高，較之缺血前水平顯著升高，通過缺血預(yù)處理后LPC+I/R實驗組中

5、小鼠心肌組織中的氧分壓水平較I/R組降低；與假手術(shù)相比較復(fù)合酶II和復(fù)合酶III（琥珀酸細胞色素c還原酶，SCR），細胞色素c氧化酶（CcO）以及還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸脫氫酶（NADH-DH）在LPC組中均升高，但在I/R實驗組中活性均降低，通過缺血預(yù)處理后LPC+I/R實驗組SCR，CcO和NADH-DH活性與假手術(shù)組無明顯改變；錳超氧化物歧化酶在LPC實驗組和LPC+I/R實驗組中增加。
　　 【結(jié)論】研究結(jié)果表明延遲相

6、缺血預(yù)處理可能通過增加錳超氧化物歧化酶的表達維持了SCR，CcO以及NADH-DN的活性，保護了線粒體的功能，有效減輕缺血后高氧合狀態(tài)，減輕了缺血再灌損傷。
　　 第三部分
　　 【目的】長時間缺血后充分再灌注前通過短時多次的缺血/在灌注過程可有效降低缺血再灌注損傷，即缺血后處理（IPOC）。缺血梗死的嚴重程度與缺血時間成正相關(guān)，研究表明當缺血時間過短或者過長都會影響IPOC的保護效果。因此我們研究目的旨在揭示不同缺血時

7、間條件下，缺血后處理對對缺血再灌注損傷的影響，從而確定缺血后處理對缺血后心臟保護作用的“窗口期”，并闡明其發(fā)生機制。
　　 【方法】野生型C57BL/6小鼠隨機分為15，30，45和60分鐘缺血再灌注實驗組，和15，30，45，60分鐘缺血后處理組及假手術(shù)組。體內(nèi)組織氧分壓采用電子順磁共振法測量。局部血流量采用激光多普勒技術(shù)測定。再灌后60分鐘缺血危險區(qū)心肌組織標本用于測定線粒體酶（琥珀酸細胞色素c還原酶, 還原型煙酰胺腺嘌呤二

8、核苷酸脫氫酶以及細胞色素C氧化酶）活性。再灌后24小時心臟用于測定梗死面積。
　　 【結(jié)果】缺血后梗死面積的測量表明：15分鐘缺血時在I/R組和IPOC組中均無梗死形成。與I/R組想比較IPOC可有效保護30分鐘（12.4±2.2vs. 32.2±0.7％）和45分鐘（21.0±1.3vs. 37.9±0.7％）缺血心臟，但對60分鐘缺血后心臟無保護作用（46.4±2.9vs. 45.6±3.8％）。缺血后處理可顯著降低 30分

9、鐘和45分鐘缺血后再灌注心肌組織中氧分壓，但對60分鐘長時間缺血時無明顯改善。局部血流量測定顯示在30分鐘，45分鐘和60分鐘缺血實驗中，再灌注60分鐘時局部血流量逐漸降，分別是5.3±0.4, 4.3±0.1和3.9±0.2 (a.u.)。缺血后處理可以顯著改善30分鐘和45分鐘局部血流量（7.2±0.2, 5.2±0.3）。缺血后處理對30分鐘和45分鐘缺血時心肌組織線粒體酶活性具有保護作用，但對60分鐘實驗組無影響。