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文檔簡介
1、目的:探討代謝葉酸的亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolatereductase,MTHFR)基因C677T和A1298C位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)(singlenucleotidepolymorphism,SNP)與非綜合征性唇腭裂(nonsyndromiccleftlipwithorwithoutcleftpalate,NSCL/P)發(fā)生的關(guān)系。 方法:提取76個患兒及父母和60個正常兒童外周血DNA,應(yīng)
2、用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction,PCR)分別擴(kuò)增亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T和A1298C片段,2%瓊脂糖凝膠電泳,EB染色檢測PCR擴(kuò)增結(jié)果。用HinfⅠ、MboⅡ限制性內(nèi)切酶酶切方法(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)分別酶切消化亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T和A1298C片段,分別采用15%和20%非變性聚丙
3、烯酰氨凝膠(交聯(lián)度49∶1)電泳,常規(guī)硝酸銀染色,檢測亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因C677T和A1298C片段長度多態(tài)性,分析記錄基因型,用病例對照方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果:對于MTHFR基因C677T,75個NSCL/P核心家庭中有48個雜合子父母,對其進(jìn)行以父母為對照的病例對照研究,計(jì)算傳遞失衡指數(shù)(transmitteddisequillibriumtest,TDT),x2=0.02,P>0.05;76例NSCL
4、/P患兒和60例正常兒童基因型及等位基因頻數(shù)病例對照研究,x2<9.91,P<0.05;NSCL/P患兒不同類型與正常兒童的基因型和等位基因頻數(shù)相比較,結(jié)果單純性唇裂與對照組比較(x2=8.39,P<0.05)和單側(cè)唇裂伴腭裂與對照組比較(x2=5.23,P<0.05)差異有顯著性;有家族史與無家族史患兒基因型和等位基因頻數(shù)的比較,結(jié)果χ3=0.003,P>0.05,差異無顯著性。而MTHFR基因A1298C,75個NSCL/P核心家庭
5、中有27個雜合子父母,對其進(jìn)行以父母為對照的病例對照研究,計(jì)算TDT,x2=4.00,P<0.05;76例NSCL/P患兒和60例正常兒童基因型及等位基因頻數(shù)病例對照研究,x2=4.42,P<0.05。NSCL/P患兒不同類型與正常兒童的基因型和等位基因頻數(shù)相比較,結(jié)果單側(cè)唇裂伴腭裂與對照組比較(x2=4.38,P<0.05)差異有顯著性;有家族史與無家族史患兒基因型和等位基因頻數(shù)的比較,結(jié)果x2=2.68,P>0.05,差異無顯著性。
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