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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:本試驗(yàn)采用聚合酶鏈反應(yīng)—單鏈構(gòu)象多態(tài)性(Polymerasechainreaction-Single-strandconformationpolymorphism,PCRSSCP)方法研究同源異性盒基因(Musclesegmenthomeoboxgene,MSX)1基因外顯子1的編碼區(qū),探討非綜合征性唇腭裂患者(nonsyndromiccleftlipwithorwithoutpalate,NSCL/P)MSX1基因外顯子1的編碼
2、區(qū)內(nèi)是否存在基因突變。 方法:隨機(jī)選擇2004年5月至2005年5月在瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院體檢的無(wú)家族史的45名健康漢族人和在口腔頜面外科住院治療的非綜合征性唇腭裂漢族患者共45例,其中單純唇裂患者(cleftlip,CL)15人,唇裂并發(fā)腭裂者(cleftlipwithpalate,CU)15人,單純腭裂者(cleftpalate,CP)15人,作為研究對(duì)象,研究對(duì)象之間均無(wú)血緣關(guān)系,采取外周靜脈血5ml,3%枸椽酸鈉抗凝,-7
3、0℃保存。提取基因組DNA,應(yīng)用紫外分光光度計(jì)和0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)所提取基因組DNA的光密度(Opticaldensity,OD)值及純度;在MSX1基因內(nèi)設(shè)計(jì)引物,采用聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerasechainreaction,PCR)方法擴(kuò)增MSX1基因外顯子1的編碼區(qū),應(yīng)用1.5%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè);對(duì)MSX1基因外顯子1的PCR產(chǎn)物進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性(Single-strandconformationp
4、olymorphism,SSCP)檢測(cè),如果經(jīng)SSCP分析后檢測(cè)到基因突變,則在1%瓊脂糖凝膠中電泳并純化回收PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,進(jìn)行測(cè)序。 結(jié)果:經(jīng)0.8%瓊脂糖凝膠電泳顯示提取樣品的基因組DNA條帶清晰,片段完好清晰,大小為20kb左右,紫外分光光度計(jì)測(cè)定所提樣品的OD值,A260/A280的比值均在1.7~2.1之間,提取的基因組DNA濃度和純度均較高,可見(jiàn)DNA質(zhì)量合格,可以作擴(kuò)增模板。1.5%瓊脂糖凝膠對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳
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